近日，中国热科院生物所蛋白质组学研究团队在高浓度琼脂糖凝胶制备及应用方面取得新进展，开发出一种分离低分子量核酸和蛋白质的高浓度琼脂糖凝胶制备和电泳方法。通过该方法可制备浓度高达14%的琼脂糖凝胶，分离相差2-bp或2-nt的DNA片段和实现植物复杂蛋白质的高分辨率分离。
核酸和蛋白质的凝胶分离一直是分子生物学研究的重要组成，但低/中浓度琼脂糖凝胶电泳对于低分子量核酸和蛋白质的分离达不到聚丙烯酰胺凝胶（PAGE）的高分辨率。针对这一难题，本研究团队利用高温高压制备了充分溶解的高浓度琼脂糖凝胶（HAG），发明了一种简单易操作的灌胶塑料盒灌制黏稠的HAG垂直凝胶，并改进了适合小分子量核酸和蛋白高浓度琼脂糖电泳（HAGE）的缓冲液条件，可有效分离在10-100 bp范围内相差2-bp或2-nt的DNA片段，在10-200 kDa范围内实现植物复杂蛋白质的高分辨率分离。HAGE不仅达到了媲美PAGE的小分子量核酸蛋白分离效果，而且制备过程中也不涉及危险化学试剂；更为关键的是HAGE可以应用于一些PAGE较难应用的研究，如In-Gel Western blot和蛋白凝胶回收。该方法的建立为植物蛋白质分离鉴定等研究提供了技术支撑。
该研究成果以“A method for high-concentration agarose gel preparation and its application in high-resolution separation of low-molecular-weight nucleic acids and proteins”为题发表于《International Journal of Biological Macromolecules》。中国热科院生物所副研究员常丽丽为论文第一作者，中国热科院生物所副研究员仝征、海口实验站研究员徐兵强为论文通讯作者。该研究得到了国家重点研发计划、海南省自然科学基金、中国热带农业科学院基本科研业务费等项目资助。
该团队自组建以来，已构建稳定的热带作物蛋白质组学技术体系，并利用比较蛋白质组学、磷酸化蛋白质组学、高通量蛋白质组学等技术重点围绕天然橡胶生物合成、木薯块根淀粉积累、香蕉枯萎病致病机理等开展研究，获得较好的研究进展，已发表学术论文49篇，其中在《Molecular & Cellular Proteomics》《Journal of Proteome Research》等期刊发表SCI论文30篇；获授权国家发明专利6件，海南省科技进步二等奖1项。
论文链接（点击阅读原文查看）：https://doi.org/10.1016/j.ijbiomac.2023.123358
日期：2023-02-15
