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手持便携式荧光检测仪使用指导

   2013-08-02 实验室资讯网284
核心提示:1.目的:实时检测现场卫生状况,保证食品安全2.适用范围:适用于对食品接触器具和生产环境、加工人员手的消毒效果检测以及对生产
 1.目的:

实时检测现场卫生状况,保证食品安全

2.适用范围:

适用于对食品接触器具和生产环境、加工人员手的消毒效果检测以及对生产过程微生物污染水平的分析、检测和加工前清洁消毒的评价。

3. 如何建立一个完善的ATP检测程序:

3.1 如何设定ATP检测标准:

设定通过,警告,不通过的标准对于实时ATP检测程序是十分重要的,这些标准依据生产环境,生产产品的种类不同而有所不同,但是设定这类检测标准的方法是相同的。

有两种方法设定ATP检测标准:1)彻底清洁;2)日常清洁

彻底清洁通常适用于高洁净要求的设备表面或易清洁的光滑表面,而日常清洁适用于粗糙和不易清洁的表面。

1)彻底清洁

2)日常清洁

“警告”数据为用户提供分析和提前预警起到非常重要的作用,当然用户也可将高于合格线的所有数据设定为不合格,而不设置警告区域

3)I-Genie通用检测标准

I-Genie也为用户提供了通用检测标准,这些标准可能不适用您所检测的目标表面,如需设定自己的检测标准,请参照1);2).

I-Genie对于易清洁表面的检测标准

I-Genie          

Pass             

Caution             

Fail       

RLU

20

20-40           

40        


 

*易清洁表面包括不锈钢表面或无凹槽平滑的表面,如水池,洗涤桶,刀片,桌面,垃圾桶等

I-Genie对于难清洁表面的检测标准

I-Genie

Pass

Caution

Fail

RLU

20

20-60

60


 

 *难清洁表面包括有凹槽,裂缝,缺口的表面,如传送带,喷嘴,O形环,橡胶管,墙壁等

I-Genie对于手表面的检测标准
 

I-Genie

Pass

Caution

Fail

RLU

30

30-60

60


 

★ 注意:

如用户已有控制点菌落总数标准平板计数标准,可将ATP检测结果与之参照。但请注意ATP是来自于微生物或有机物残留,所以只能说ATP水平与微生物数目有着密切的相关性,ATP检测与平板计数结果间不能完全一一对应,但有密切的相关性。

3.2 检测表面取样示例:

a)规则表面

用拭子头涂抹被测区域

(30-45°角、10×10 CM表面)

b)不规则表面

当不能取得10×10 CM表面积时,

应该尽量涂抹足够的区域。

3.3 I-GenieTM手持便携式荧光检测仪与CleanSenseTM表面洁净度检测试剂盒使用方式:
 

仪器自检


 

取出与所需检测样品同等量的检测瓶,剪开装有溶解液的滴管,将溶解液小心挤入瓶中,左右来回振荡检测瓶促使粉末溶解,并静置5min。
 

 
取出采样棉签,在所需检测的物体表面擦拭采样

按照图示的顺序进行涂抹

将已采好样的采样棉签放入荧光酶溶液中,并搅拌,使棉签表面的待测样品完全洗入溶液中,此过程约5s。

 将检测瓶放入i-Genie?手持式便携ATP荧光检测仪的检测池中,盖上机盖。检测并读数。

3.4 设置检测频率与周期

a) 检测时机:

1)ATP检测表面应为干燥表面。

2)一般情况下,ATP检测应在使用消毒剂使用前进行。

3)但部分CIP程序需在消毒剂使用后进行ATP检测,这种情况下,消毒剂的消毒接触时间为5分钟-15分钟。依照消毒使用规范,等待这段时间消毒剂干燥后,再进行表面取样检测。

★ 注意:可通过高压蒸汽消毒配合ATP检测,可有效节省消毒剂的使用。

b) 取样、检测频率:

根据资金状况,选取适合的取样点数量,推荐以下策略:

1)ATP检测应作为抽检和初筛手段。(结果可疑环节可进一步采样进行标准平板计数)

2)检测方案(仅供参考)

l    每座车间建立5-10个检测点。

l    每个检测点每周抽检1-2次。

l    定期将检出结果以图表形式进行总结和报告,为控制措施提供短期评价。

l    提供季度或年度报告,对更长期数据进行分析。

3.5 根据ATP快速检测结果制定纠偏措施
 

检测结果

结果判断

检测值低于合格(Pass)值

清洁合格

检测值介于合格(Pass)值与不合格(Fail)值之间,需要警惕(Caution)

下次清洁时应特别留意该区域清洁

检测值高于不合格(Fail)值

重新清洁


 

4. 有关食品安全和卫生检测的问答

4.1 哪些因素可能影响食品安全和卫生?

生物(如细菌总数超标、致病菌污染等)、化学(农药残留、有毒添加剂等)、物理(放射污染等)及转基因产品(有害遗传效应等)四大因素。其中,以细菌污染食物、饮用水引发食源性中毒最为常见,其危害的范围最广。

4.2 国内外通常采用什么方法进行食品细菌总数和卫生、防疫检测?

“常规法”和“ATP荧光快检法”。常规法是我国卫生部规定至今仍然沿用的方法,因此,又称“国标法”,即(细菌)活细胞平皿计数法。

4.3 “常规法”和“ATP荧光快检法”的共同点和主要差别是什么?

两种方法都能用于检测样品中的细菌总数,提供有关卫生防疫数据。主要差别在“时效性”,常规法至少要1-2天才能得到结果,快检法能在1-5分钟内得到实时检测数据。

4.4 为什么两种方法在“时效性”上有这样大的差异呢?

因为它们所依据的基本原理各不相同。“常规法”是让检样中原先看不见的细菌细胞,在稀释涂布后通过在营养琼脂培养基上37℃,48小时的保温培育,这样,一个活的细菌细胞经多次分裂繁殖形成数以亿计,肉眼可见的细菌集群(菌落),然后通过计数得到结果,即菌落形成单位/毫升(克)[CFU/ml(g)]。

“ATP荧光快检法”则基于虫光素酶能催化细菌细胞的ATP发出荧光,荧光检测仪能快速、准确计量荧光值的原理。因此,检样中细菌细胞越多,ATP量就越大,发出的荧光就越强。这样,在排除检样中非细菌ATP干扰的情况下,检测荧光值(RLU)就能确定细菌的细胞数[CFU/ml(g)]。

4.5 两种检测方法哪一种更准确?两种检测方法得到的数据一致吗?

在回答这一问题前,让我们重温微生物学的两个基本概念:细菌或微生物对人类生活,生产造成的有利(如用于抗菌素生产)或有害影响(如污染食品、引发疾病)都非单一或少数细菌细胞的作用,而是单位体积内数以十万、百万细胞群体的效应。其次在适宜条件下,细菌每20-30分钟就能分裂繁殖一代。以大肠杆菌为例,10万个细胞/毫升二小时后就成了640万细胞/毫升。

因此,正确的回答是,两种方法都能满足特定时期细菌总数检测和卫生监测的需求,但时效性有重大差异。快检方法更有利于保障食品安全水平的全面提高。通过常规法和ATP荧光快检法实际检测建立一个两者之间可以互相参照,符合食品安全卫生标准的有效范围(如合格、警告、不合格)是发达国家的通用做法。

4.6 在食品安全方面国外有哪些值得借鉴的经验和措施?

上世纪90年代后,美、英、日等国就已依据萤火虫发光原理,研制并推广使用ATP荧光法快检设备用于检测食品细菌总数或卫生防疫监测。这些设备既能提供实时的检测数据,又有准确、便携、使用容易等特点。不仅弥补了“常规法”时效性差的不足,又能发挥防患于未然的预警作用。有效地保障了食品安全总体水平的提高,也促进了如HACCP等食品卫生理念的诞生。

4.7 HACCP认证体系的主要涵义和作用是什么?

HACCP是“危害分析关键控制点”一词的英语缩写,源于上世纪70年代美国太空总署提出的有关食品安全基本理念,即(1)危害食品安全的可能因素包括生物(转基因产品)、化学、物理四个方面;(2)从原料到食品通常经历加工生产-产品包装、储存、运输-配发销售等环节;(3)食品原料的品质、生产环境、设施、操作人员的卫生水平都将影响终产品-食品的安全卫生水平。因此,只有将所有可能影响食品安全的危害因子全部纳入监控范围,采用快检方法实施监控才能从源头开始,从而有效地保障食品,并留有补救时间防患于未然。

美、日、欧盟等国已将实施HACCP认证体系列为法定措施。我国卫生部已于2002年颁发《食品加工企业的HACCP实施指南》[卫法监发174号]。

4.8 “ATP荧光快检法”和实施食品安全的HACCP预警、溯源管理制度有何关系?

在建立和推广使用ATP荧光法快检技术前,只能靠目测或平皿计数法评估产前或清洁消毒后生产线、食品接触表面的卫生水平。这两种方法要不是灵敏度不够,就是取得结果的时间太长,无法满足生产的实际需要。换一句话说,只有采用ATP荧光法快检一类方法才能实施HACCP和食品安全的溯源和预警制度。

4.9 美、日、欧盟各国如何评价ATP荧光快检法和建立相关检测标准?

通过ATP荧光快检法得到的是来自食物残渣和微生物细胞两个部分ATP的总值。多数情况下,来自微生物细胞的比例较小。但是,由于食物残渣既是微生物生长的培养基,又起抵消灭菌效果的作用。因此,关键在确定避免重新污染的ATP临界值,而非单纯依据细菌细胞ATP值折算的细菌菌落数(cfu)。这就是多数卫生监测试剂盒不设置通用ATP标准,也不必期望ATP与CFU之间有确定相关关系,容易引起初用者疑虑的原因。统计结果证实,凡ATP荧光法显示卫生水平改善,则平皿计数结果也一定改善。如果检测点ATP水平高,即便是无菌的,次日早上必然大量滋生细菌导致食品污染。

因此,发达国家的普遍做法是:首先通过ATP快检步骤对食品原料及经过清洁、消毒后食品原料接触表面是否达到卫生标准作出有数字依据的评价。其次,对易于引发微生物污染的关系部位实施重点监控。最后,制订出符合本单位情况,又符合卫生要求的ATP数值范围。

4.10 具备什么条件有利于在我国普遍实施HACCP认证体系?

(1)发展拥有我国自主知识产权的食品安全关键技术,提供准确、有效、便携、操作容易、价格能为国内广大用户接受的食品安全检测设备和试剂系统。

(2)建立与快检技术相匹配的国家、企业检测标准。

(3)普及与快检技术相关的卫生学和卫生监督指导新理念、新知识。

5. ATP快速检测综合示意图


 





 
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