![](http://www.shijieshipin.com/file/upload/202106/05/075207481.png)
![](http://www.shijieshipin.com/file/upload/202106/05/075207301.png)
在 HPLC系统的基础上,加上一台miniDAWN或DAWN检测器,会大大简化蛋白的表征,可以直接测绝对分子量并可观察溶液中的蛋白特性。
图 1是轻度氧化的基本纤维原细胞增长因子(bFGF)(由0.2当量的DTNB制成)的色谱图。前两个峰的光散射信号大约是UV信号的两倍,而第三个峰两者的信号强度相等。从图上很清楚地看出,从左到右三个峰,其中两个是两种二聚体,一个是单体bFGF,它们的分子量分别是33K,34K,17K道尔顿。
图 2是四个不同组分的分子量对洗脱体积图,每一组分都有不同程度的氧化。很明显,存在着二聚体、三聚体、四聚体,但出现的顺序和洗脱体积的顺序不一致。
采用的系统是 HPLC,包括HP 1050四元泵、脱气机、自动进样器,UV二极管阵列检测器和一台miniDAWN。一根Vydac C4蛋白柱。(150mm×4.6mm,300埃),流速0.7ml/min.
miniDAWN可对每个洗脱峰进行绝对表征,另外,还可测得每一洗脱片段的均方根旋转半径。例如:对bFGF五聚体,其旋转半径大约为13纳米,表明分子量85K道尔顿的多聚体是棒状结构的构型。
只要在反相色谱 RPC上加一台miniDAWN就可对每一洗脱片段测量绝对分子量、多聚体的形状、分子尺寸 、分子构型。