一、仪器各组件
泵 ：四元泵、二元泵
在线脱气器
进样器：自动进样器及手动进样器
柱温箱
检测器： DAD检测器、UV检测器
二、何时需要使用Agilent在线脱气机
如果在低UV波长段，用最高灵敏度进行检测
如果要求使用最佳进样精度
如果要求保留时间重现性很高（在0.5ml/min流速以下）
如果样品和检测对流动相中溶解氧敏感
三、开机
打开计算机,进入Windows NT 或Windows 2000 画面,并运行Bootp Server程序（点击左下方【Bootp Server】图标）
打开色谱仪各组件电源，待Bootp Server里显示已联上各组件的信息及各模块自检完成后，双击Instrument 1 online ，图标打开工作站。化学工作站自动与1100通讯。
四、排气
将流动相放入溶剂瓶中，打开Purge 阀，依次单击【Pump】→【Set up Pump】，设Flow为2ml/min，单击OK ，再依次单击【Pump】→【control】，选中on，单击OK，则系统开始Purge至管路无气泡为止，切换管路反复操作至所需管路均无气泡。
在【control】选项中选off，关闭泵，关闭Purge 阀。单击泵下面瓶图标，输入溶剂的实际体积和瓶体积。
打开10％异丙醇溶液控制阀，用针筒抽吸至管路中有液体流出。调节控制阀松紧，控制流量至流出量约为每分钟5～15滴。
五、编辑分析方法
新方法建立：点击【Method】，点击【Edit entire method】或【New method】选项，进行方法编缉。
在Method Comments 中加入方法的信息如色谱条件、方法的用途等点击Ok进入下一画面
泵参数设定：设定流速、比例、梯度、运行时间、平衡时间等。点击Ok进入下一画面
自动进样器参数设定：设定进样量、洗瓶位置、进样方式等
进样方式：“Standard Injection”只能输入进样体积“Injection with Needle Wash”可以输入进样体积和洗瓶位置此方式针从样品瓶抽完样品后会在洗瓶中洗针
Use injector program：可以点击Edit 键进行进样程序编辑
柱温箱参数设定：在”Temperature”下面的方框内输入所需温度,并选中它,点击”more>>”键,选中“Same as left”使柱温箱的温度左右一致。点击Ok进入下一画面
检测器参数设定－UV：在”Wavelength”下方的空白处输入所需的检测波长,如254nm, 在“Peakwidth (Response time)”下方点击下拉式三角框,选择合适的响应时间, 如>0.1min(2s)，在Timetable 中可以Insert 一行输入随时间切换的波长。点击Ok进入下一画面
检测器参数设定－DAD
样品波长--一般选择最大吸收处的波长
样品带宽BW-一般选择最大吸收值一半处的整个宽度
参比波长-一般选择在靠近样品信号的无吸收或低吸收区域
参比带宽BW-至少要与样品信号的带宽相等许多情况下用100nm作为缺省值
Peak width Response time 其值尽可能接近要测的窄峰峰宽
选中所用的灯点击Ok进入下一画面
方法保存
单击Method 菜单选中Save method as 输入一方法名，如test
单击Ok
选择已有方法：点击【Method】，点击【Load method】选项，选取已存的各种操作方法。
六、样品分析与采集数据
将样品放于样品盘中相应位置，所有的样品均需澄清。
待仪器显示Ready，基线平稳，从【Run control】菜单中选择【Run Method】，开始进样分析。或点击【Start】开始进样分析。
数据处理：单击【View】菜单，单击【Data analysis】选项，进行数据分析。单击【View】菜单，单击【Method and Run control】选项，回到样品分析界面。
数据分析方法编辑
从File 菜单选择Load signal 选中您的数据文件名
单击Ok
积分
从Integration 中选择“Auto integrate”,如积分结果不理想,再从菜单中选择Integration Events 选项选择合适的Slope sensitivity 、Peak width 、Area reject、 Height reject。
从Integration 菜单中选择Integrate 选项则数据被积分
如积分结果不理想则修改相应的积分参数直到满意为止
单击左边图标将积分参数存入方法
七、关机
冲洗系统：反相柱用10％的甲醇水冲洗系统30分钟，再用100％甲醇冲洗系统20分钟，然后关泵，正相柱先用合适溶剂冲洗，后用柱保存液冲洗。
退出工作站，关闭计算机。
关闭10％异丙醇溶液控制阀。
关闭仪器各组件
关掉Agilent 1100电源开关
八、注意事项
1、色谱柱使用前仔细阅读色谱柱附带的说明书，注意适用范围，如pH值范围、流动相类型等；必须使用保护柱；色谱柱长时间不用时，柱内应充满溶剂，两端封死保存。
2、流动相使用前必须过滤，不要使用多日存放的蒸馏水（易长菌）。
3、仪器运行时，泵头必须用10%异丙醇水溶液虹吸冲洗，不能干涸。
4、注意各流动相所剩溶液的容积设定，若设定的容积低于最低限会自动停泵。
5、对于手动进样器当使用缓冲溶液时要用水冲洗进样口同时搬动进样阀数次每次数毫升
6、若使用含盐流动相，开机时必须先用10%甲醇水溶液冲洗20分钟以上再换上含盐流动相。
7、溶剂瓶中的沙芯过滤头容易破碎，在更换流动相时注意保护，当发现过滤头变脏或长菌时，不可用超声洗涤，可用35%稀硝酸溶液浸泡后再洗涤。
8、检测器的灯有使用寿命限制，一般在正式进样分析前30min 左右开启D灯或W灯，分析结束，立即关灯。
9、使用双泵时，A、B、C、D四相中，若所用流动相中有含盐流动相，则A、D（进液口位于混合器下方）放置含盐流动相，B、C（进液口位于混合器上方）放置不含盐流动相。
九、溶剂和样品过滤的重要性
对色谱柱、仪器起到保护作用
由于填料颗粒很细色谱柱内腔很小，溶剂和样品中的细小颗粒会使色谱柱堵塞
仪器溶剂和样品中的细小颗粒会增加进样阀的堵塞和磨损同时也会增加泵头内的蓝宝石活塞杆和活塞的磨损
消除由于污染对分析结果的影响
十、样品过滤头的类型
30mm内径适用于大进样量的过滤由0.2?m和0.45?m两种规格,材料有纤维素,醋酸纤维,聚四氟乙烯处理样品体积少于50?l
13mm内径适用于一般进样量的过滤由0.2?m和0.45?m两种规格,材料为纤维素
3mm内径适用于小进样量的过滤由0.2?m和0.45?m两种规格处理样品体积为7?l
十一、滤膜类型
聚四氟乙烯滤膜：适用于所有溶剂、酸和盐。无任何可溶物脱落。
醋酸纤维滤膜：不适用于有机溶剂，特别适用于水基溶液。可用于蛋白质和其相关样品
尼龙66滤膜：适用于绝大多数有机溶剂和水溶液可用于强酸、70%乙醇、二氯甲烷。不适用于二甲基甲酰胺。
再生纤维素滤膜：具有蛋白吸收低同样适用水溶性样品和有机溶剂
十二、流动相脱气的重要性
防止因产生气泡增加基线的噪音，造成灵敏度下降甚至无法分析
溶解的氧气可能会导致样品中某些组份被氧化
柱中固定相发生降解而改变柱的分离性能
若用FID 可能会造成荧光猝灭
常用的脱气方法比较
氦气脱气法：利用液体中氦气的溶解度比空气低连续吹氦脱气效果较好但成本高
加热回流法：效果较好但操作复杂且有毒性挥发污染
抽真空脱气法：易抽走有机相
超声脱气法：流动相放在超声波容器中用超声波振荡10～15min 此法效果最差。
在线真空脱气法：真空脱气机利用膜渗透技术
在线脱气智能控制无需额外操作成本低脱气效果明显优于以上几种方法并适用于多元溶剂体系
十三、如何防止溶剂瓶内溶剂过滤器的堵塞及其处理
请严格执行溶剂过滤
请勿使用多日存放的蒸馏水及磷酸盐缓冲液
如果应用许可可在溶剂中加入0.0001---0.001M的叠氮化钠.
在溶剂瓶内溶剂的上方小流量连续吹氩气,以隔绝空气
避免使溶剂瓶暴露在直射阳光下尽量使用琥珀色的溶剂瓶盛放水溶液或磷酸盐缓冲液
堵塞后的处理法方法：
将过滤头从组件中取下在35%硝酸液中浸泡1h，然后用二次蒸馏水冲洗干净。
十四、泵的维护
1、流动相使用前必须脱气过滤
2、使用缓冲盐时要加在线Seal-wash选项
3、关机前反相色谱柱用10%的甲醇水冲洗系统20分钟，然后用有机溶剂冲洗系统10分钟，然后关泵。正相色谱柱用适当的溶剂冲洗。
4、及时更换Purge Valve内的过滤芯，当打开Purge Valve时压力高于10bar 表明过滤芯已堵
5、使用合适的密封圈：标准密封圈能适合于大多数应用。但使用正相溶剂最好使用聚四氟乙烯密封圈，泵的压力限制最大压力设为200bar。
6、使用梯度比例时的注意事项：
当盐溶液与有机溶剂溶液混合时盐溶液能与有机溶剂溶液完全混溶而不会出现沉淀。
由于在比例阀的混合点重力作用使盐颗粒沉淀下来通常阀A接水相/盐溶液D接有机溶剂此法连接可有效使盐回落到盐溶液中并被溶解若颠倒过来盐可能落在有机溶剂中出现问题
当使用缓冲盐溶液和有机溶剂时推荐将缓冲盐通道接在A通道上有机溶剂通道直接接在A通道的上方D通道上定期用水冲洗所有的通道以除去阀口上可能出现的盐沉淀
十五、手动进样阀使用注意事项
进样量的多少要根据定量管的LOOP体积决定
当样品量少时进样体积由注射器的进样体积决定但最大进样体积要小于1/2loop体积
当样品量较多时进样体积由定量管的体积决定为保证样品完全把定量管的流动相置换干净需注射5-6倍的LOOP体积
要使用专用的液相注射器进样绝对不可以用气相的注射器
十六、自动进样器使用注意
使用自动洗针功能
自动洗针功能可以把程序设置为“带有洗针的进样”,或将自动洗针功能包 含在进样器程序中。当使用自动洗针功能时，进样针在取样后会转移到洗针 步骤。造成携留效应的主要原因是残留在进样针外的少量样品。通过进样后 的洗针功能可以立即洗去针外表面上残留的样品。当进样阀转回到主流路 时，定量管和针内所有的样品都被冲洗到色谱柱中。这种结合洗针和冲洗管 路的设计可以把携留效应减低到最小的程度。
去掉洗涤瓶盖：为了获得最佳的分析结果，装有溶剂的洗涤瓶是不加盖的，而且洗涤瓶中的 溶剂对样品组分有较好的溶解作用。如果洗涤瓶有盖将会有少量样品留在密 封垫上，这样会把残留的样品带到下一个样品中。
