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血球计数板的使用,常做镜检计数的你不得不看~~

   2017-06-06 食品实验室服务公众号1023
核心提示:血球计数板是显微镜直接计数法最常用的一种计菌仪器,是一种专门用于计算较大单细胞微生物的器材,由于操作简单快捷,并可以对细
     血球计数板是显微镜直接计数法最常用的一种计菌仪器,是一种专门用于计算较大单细胞微生物的器材,由于操作简单快捷,并可以对细胞形态进行分析,因此在微生物实验室广泛使用。 
    简介
 
    血球计数板是由一块比普通载玻片厚的特质玻片制成,玻片中部有四条下凹的槽,将玻片分为三个平台,中间的平台较宽,其中间又被一短横槽隔为两半,每半边上面刻有一个方格网。方格网上有9个大方格,其中只有中间的一个大方格为计数室。常见的血球计数板的计数室有两种规格,一种是25×16型,称为希里格式血球计数板,此计数板分25个中方格,每个中格分16个小方格;一种是16×25型,称为麦氏血球计数板,此血球计数板分16个中方格,每个中格分25个小方格,这两种规格的共同点是均有400个小方格组成。计数室的长宽均为1mm,深度为0.1mm,其容积为0.1mm3。用血球计数板计数时,先测定每个小方格(或中方格)的微生物量,再换算成每mL菌液(或每g样品)中微生物细胞的数量。由于血球计数板比较厚,不能使用油镜观察,因此不适合观察较小的细菌。
 
    操作步骤
 
    1.先在显微镜下检查计数板的计数室,看有无杂质或菌体,若不净则用沾有95%酒精的脱脂棉轻轻擦洗,再用蒸馏水冲净,最后用滤纸吸干水分后用擦镜纸擦净。
 
    2.用无菌水稀释菌液,直至菌液稀释到每小格的菌数可数,大约每格60-100个细菌。
 
    3.用滴管吸取少许摇匀的菌液,从计数板的中间平台两侧的沟槽内沿盖玻片的下边缘滴入一小滴(不宜过多),菌液利用毛细管作用沿两玻片间自行渗入计数室,切勿有气泡产生,并用吸水纸吸取沟槽内多余的菌液。也可在计数区直接滴加菌液,然后盖上盖玻片,利用毛细作用让菌液充满计数区,避免有气泡产生。
 
    4.静置5min左右,先在低倍物镜下找到计数室的位置,再转换到高倍镜下计数。
 
    5.计数时用25中格计数板,按对角线方位,取计数室四个角和中央5个中格(即80个小格)的菌数;计数板是16中格的计数板,按对角线方位,取四个角的四个中格(即100个小格)的菌数。观察计数时,要不断的调节显微镜的微调螺旋,在不同的焦距下看到计数室内不同空间位置的菌体,避免遗漏。对于中格线上的菌体,计数时定好规则,如数上线不数下线,数左线不数右线,以减少误差。重复计数2-3次(数值相差不应过大,否则要重新计数),取几次的平均值,按公式计算出每mL菌液所含菌量。
 
    每mL菌液的含菌数=每小格菌的数量×400×10000×稀释倍数
 
    25×16规格的计数板:
 
    菌数/mL=80个小格中菌数/80×400×10000×稀释倍数
 
    16×25规格的计数板:
 
    菌数/mL=100个小格中菌数/100×400×10000×稀释倍数
 
    6.用后的血球计数板要用水流柱清洗干净,不要用刷子等刷洗,避免损坏网格刻度。洗净后自然晾干或用滤纸吸干水后再用擦镜纸擦干净。对于有致病性的菌,要先在5%石碳酸溶液中消毒后,再清洗干净。
 
    当然,血球计数板的缺点也是很明显的,首先是食品颗粒与细胞不易区分,活性细胞和非活性细胞都被计数,因此计数结果比平板计数法要高,部分微生物细胞不易分散均匀,有一些细胞可能没被计数,另外长时间操作计数也容易引起眼部疲劳。


 
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