猪肉中兽药多残留检测的固相萃取方法
®
（Copure HLB）
一、实验目的
本研究针对猪肉中多种兽药残留同时检测的目的，开发了经过优化的固相萃取前处理方法和HPLC分析方法。
待测物质为主要的抗生素兽药种类中具有代表性的化合物，包括磺胺类、四环素类、喹诺酮类、氯霉素类。
二、实验目标物
麻保沙星 (CAS:115550-35-1)，双氟沙星（CAS:98106-17-3），土霉素（CAS:79-57-2），氟苯尼考
（CAS:73231-34-2），磺胺多辛（CAS:2447-57-6），磺胺间二甲氧嘧啶（CAS:155-91-9），氯霉素
（CAS:56-75-7）。
三、应用范围
本方法适用于猪肉中多种兽药残留的检测的HPLC检测及确证。
四、实验材料
biocomma ®Copure ® HLB 固相萃取柱60mg/3mL(Cat. No. COHLB360)。
五、实验步骤
1、样品提取
准确称取猪肉3 g于50 mL离心管中，加入0.1 mol/L的EDTA-Mcllvaine溶液15 mL，漩涡摇匀1 min，冰水浴
超声10 min，控制样品温度<15 ℃；5000 r/min离心8 min。取上清液，重复提取一次，合并清液、快速滤纸过
滤，备用。
2、SPE柱净化
(1)活化：HLB固相萃取柱使用前用3 mL甲醇、3 mL水活化 。
(2)上样和洗脱：在HLB固相萃取柱上加入10 mL备用样液，弃去流出液， 用3 mL 5%甲醇水溶液（v/v）淋
洗，弃去淋洗液，抽干小柱；用8 mL甲醇-乙酸乙酯溶液（1:9，v/v）洗脱，收集洗脱液（整个上样、洗脱过程
保持流速2 mL/min） 。
(3)重新溶解：洗脱液40 ℃氮吹吹干，1 mL甲醇定容，过0.45 μm 滤膜，上机测试。
3、HPLC条件
设 备：Waters Alliance 2695
色谱柱 ：Welch Ultimate XB-C18 (4.6×250 mm, 5 μm )
检测器 ：Waters 2487 紫外检测器
流动相 ：A：乙腈 B： 0.1%甲酸水溶液（v/v）
洗脱方式：梯度洗脱
表1 梯度洗脱条件
流速：1.0 mL/min
检测波长：270 nm
进样体积: 20 μL
六、实验结果
1、4 mg/kg猪肉中多种兽药的添加回收结果
表2 4 mg/kg猪肉中多种兽药的添加回收结果
2、添加水平为4 mg/kg猪肉中多种兽药检测的液相色谱图
