（Copure ® HLB）
一、实验目的
本研究利用固相萃取法作为样品的前处理方法，HPLC法作为分析方法，检测血清中β受体激动剂含量。该方 法可简化样品的前处理过程，节省有机溶剂的使用，操作简便。
二、实验目标物
沙丁胺醇 (CAS:18559-94-9)、班布特罗(CAS:81732-65-2)、克伦特罗(CAS:129138-58-5)、莱克多巴胺 (CAS:97825-25-7)。
三、应用范围
本方法适用于血清中β-受体激动剂的检测的HPLC检测及确证。
四、实验材料
biocomma ®Copure ® HLB固相萃取柱60 mg/3 mL (Cat. No. COHLB360)。
五、实验步骤
1、样品提取
准确移取样品1.0 mL血清样品，备用。
2、SPE柱净化
(1)活化：HLB固相萃取柱使用前用1 mL甲醇、1mL水活化 。
(2)上样和洗脱：在HLB固相萃取柱上加入1 mL血清样品，弃去流出液； 用1 mL 5%甲醇水溶液（v/v）、淋 洗，弃去淋洗液；抽干小柱；用2 mL甲醇溶液洗脱，收集洗脱液（整个上样、洗脱过程保持流速1mL/min）。
(3)重新溶解：50 ℃缓慢氮气流条件下吹至近干，用1 mL 甲醇溶液溶解。经0.22 μm滤膜重新过滤，供高效液 相色谱测定。
3、HPLC条件
设 备：Waters Alliance 2695
色谱柱 ：Welch Ultimate XB-C18 (4.6×250mm)
检测器 ：Waters 2475 荧光检测器
检测波长：激发波长：206 nm
发射波长: 226 nm
流动相：A:乙腈 B: 0.1%甲酸水
表1: 梯度洗脱条件
流速：1.0 mL/min
进样体积:20 μL
六、实验结果
1、1 mg/kg血清中β-受体激动剂的添加回收结果
表1 1 mg/kg血清中β-受体激动剂的添加回收结果
2、添加水平为1 mg/kg血清中β-受体激动剂检测的液相色谱图
图1 添加水平为1 mg/kg血清中β-受体激动剂检测的液相色谱图
