猪瘦肉中对乙酰氨基酚的固相萃取方法
（Copure®对乙酰氨基酚检测柱）
一、实验目的
本研究利用固相萃取法作为样品的前处理方法，HPLC法作为分析方法，检测猪瘦肉中对乙酰氨基酚的含量。该方法可简化样品的前处理过程，节省有机溶剂的使用，操作简便。
二、实验目标物
对乙酰氨基酚(CAS:103-90-2)。
三、应用范围
本方法适用于肉制品中对乙酰氨基酚检测的HPLC检测及确证。
四、实验材料
biocomma® Copure® 对乙酰氨基酚检测柱。
五、实验步骤
1、样品提取
准确称取猪瘦肉2.0g，加入10mL乙酸乙酯，震荡、涡旋2min，4000r/min离心5min取乙酸乙酯层；向猪肉中再加入乙酸乙酯10mL重复提取一次；合并乙酸乙酯提取液，于50℃氮吹至近干，6mL水溶解，正己烷5 mL×2次除脂，弃去正己烷，水层备用。
2、SPE柱净化
(1)活化：对乙酰氨基酚专用柱使用前用5mL甲醇、5mL水活化。
(2)上样和洗脱：将提取备用液过柱，弃去流出液，加入5 mL 5 %甲醇水溶液淋洗，弃去淋洗液，抽干小柱；加
入8mL甲醇洗脱，收集洗脱液（上样、洗脱过程保持流速1mL/min）。
(3)重新溶解：洗脱液在40℃下氮吹至近干，1mL甲醇定容，0.22μm滤膜过滤，滤液待上机测试。
3、HPLC条件
设备： Waters Alliance 2695
色谱柱：Welch Ultimate XB-C18 (4.6 mm×250 mm, 5 μm)
检测器：Waters 2487 紫外检测器
检测波长：250 nm
等度洗脱：A：乙腈B：0.05mol/L磷酸氢二钾溶液（pH=2.3）
洗脱方式：等度洗脱，A：B=5：95
流速：1.0 mL/min
进样体积：20μL
六、实验结果
1、1.0mg/kg猪瘦肉基质中对乙酰氨基酚的添加回收结果
表11.0mg/kg猪瘦肉基质中对乙酰氨基酚的添加回收结果
2、添加水平为1.0mg/kg对乙酰氨基酚检测的液相色谱图
图1添加水平为1.0mg/kg对乙酰氨基酚检测的液相色谱图
