生姜中涕灭威及其代谢物检测固相萃取方法（Copure® NH2）
一、实验目的
本研究利用固相萃取法作为生姜样品的前处理方法，LC-MS/MS法作为检测手段。该方法可简化样品的前处理过程，节省有机溶剂的使用，操作简便。
二、实验目标物
三种涕灭威及其代谢物标准品：涕灭威(CAS:116-06-03)，涕灭威砜(CAS:1646-88-4)，涕灭威亚砜
(CAS:1646-87-3)。
三、应用范围
本方法适用于生姜、大米、花生等样品中涕灭威、涕灭威砜及涕灭威亚砜LC-MS/MS检测及确证。
四、参考标准
《SN/T 2441-2010 进出口食品中涕灭威、涕灭威砜、涕灭威亚砜残留量检测方法液相色谱-质谱/质谱法》。
五、实验材料
Biocomma®Copure® NH2 固相萃取柱 500mg/3mL(Cat.No.CONH3500)。
六、实验方法
1、样品提取
称取5.0 g生姜试样(精确至0.01 g)于50 mL离心管中，加入20 ｍL乙腈，均质2 min，振荡提取20 min，上清液过无水硫酸钠收集到分液漏斗中，残渣再加入20 mL乙腈，重复上述操作一次，合并2次滤液，加入20 mL用乙腈饱和的正己烷，振荡10 min，静置分层，弃去正己烷层，乙腈层于40 ℃下旋转蒸发浓缩至干，用2 mL甲醇-二氯甲烷(1:99, v/v)溶解，待净化。
2、SPE柱净化
(1)活化：加入5 mL甲醇-二氯甲烷(1:99, v/v)活化，弃去流出液。
(2)上样：加入待净化液，流速控制在1 mL/min内，收集流出液。
(3)洗脱：用5 mL甲醇-二氯甲烷(1:99, v/v)洗脱，接收流出液，并重复一次，合并步骤(2)、(3)流出液。
(4)浓缩定容：40 ℃缓慢氮气流条件下吹至近干(约0.5 mL)后挥干，用1.0 mL乙腈-0.1%甲酸水溶液(10:90,v/v)定容至1 mL，过0.45µm微孔滤膜，上LC-MS/MS，待测定。
3、LC-MS/MS条件
色谱柱：Venusil ASB C18(2.1×150 mm，5 µm)
质谱仪：API 4000
流动相：A:乙腈溶液；B:0.05%甲酸水溶液
洗脱方式：梯度洗脱
表1 流动相梯度洗脱程序
流速：0.3 mL/min
柱温：30 ℃
进样量：5 µL
质谱仪：API 4000
离子源：电喷雾(ESI)
扫描模式：正离子
检测方式：多反应监测(MRM)
表2 质谱仪离子源参数 表3 涕灭威、涕灭威砜及涕灭威亚砜的母离子和子离子参数表
七、实验结果
1、生姜基质10 µg/kg加标回收结果
表4 生姜中10 µg/kg加标回收实验结果
2、添加水平为10µg/kg生姜基质中涕灭威及其代谢物检测的色谱图
图1 涕灭威及其代谢物总离子流图 图2 涕灭威(Aldicarb)(208.1/89.1)质谱图
图3 涕灭威砜(Aldicarb S)(223.1/86.2)质谱图 图4 涕灭威亚砜(Aldicarb Sulfone)(207.1/132.2)质谱图
