牛奶中氯霉素检测的固相萃取方法（Copure®C18）
一、实验目的
本研究利用固相萃取作为样品前处理方法，HPLC作为分析方法，检测牛奶样品中的氯霉素残留水平。该方法操作简便，可简化样品前处理过程，减少有机溶剂的使用。
二、实验目标物
氯霉素(CAS:56-75-7)。
三、应用范围
本方法适用于动物源性食品中氯霉素的检测的HPLC检测及确证。
四、参考标准
《GB/T 22338-2008 动物源食品中氯霉素类药物残留量测定》。
五、实验材料
Biocomma®Copure® C18固相萃取柱500mg/6mL(Cat.No.COC186500)。
六、实验方法
1、样品提取
准确称取牛奶5 g(精确到0.001 g)，加入乙酸乙酯15 mL，涡旋振荡1 min，摇床振荡10 min。3000 r/min转速离心10 min。将上清液转移至试管中，于45 ℃氮吹吹干，用5 mL乙腈-水溶液(5:95, v/v)溶解，待净化。
2、SPE柱净化
(1)活化：C18固相萃取柱使用前依次使用5 mL甲醇和5 mL水活化。
(2)上样和洗脱：将待净化液加入已活化好的固相萃取柱中，以1 mL/min的流速过柱，弃去滤液。用2x4 mL乙腈-水溶液(5:95, v/v)淋洗固相萃取柱，弃去淋洗液，抽干10 min。用8 mL乙酸乙酯洗脱固相萃取柱，收集洗脱液。
(3)重新溶解：洗脱液于45 ℃氮吹吹干，用1 mL乙腈-水溶液(2:8, v/v)定溶，0.22 μm微孔滤膜过滤，供高效液相色谱测定。
3、HPLC条件
设备：Waters Alliance 2690
色谱柱：Welch Ultimate XB-C18 (4.6X250 mm)
检测器：Waters 2487 紫外检测器
检测波长：268 nm
流动相：A：水 B：甲醇
洗脱方式：等度洗脱
表1 等度洗脱条件
流速：1 mL/min
进样体积：20 μL
七、实验结果
1、牛奶基质中氯霉素的0.5mg/kg添加回收结果
表2 牛奶基质中氯霉素的0.5mg/kg添加回收结果
2、 添加水平为0.5mg/kg牛奶基质中氯霉素检测色谱图
图1 添加水平为0.5mg/kg牛奶基质中氯霉素检测色谱图
