牛奶中氟苯尼考检测的固相萃取方法
（Copure® HLB）
一、实验目的
本研究利用固相萃取作为样品前处理方法，HPLC作为分析方法，检测牛奶样品中的氟苯尼考残留水平。该方法操作简便，可简化样品前处理过程，减少有机溶剂的使用。
二、实验目标物
氟苯尼考（CAS:73231-34-2）。
三、应用范围
本方法适用于牛奶中氟苯尼考的检测的HPLC检测及确证。
四、实验材料
biocomma® Copure® HLB 固相萃取柱 60mg/3mL(Cat. No. COHLB360)。
五、实验步骤
1、样品提取
准确称取牛奶2g（精确到0.001g），加入乙酸乙酯15mL，高速均质1min，加入5g无水硫酸钠，涡旋振荡1min，摇床振荡10min。4000r/min转速离心5min。将上清液转移至梨形瓶中，于45℃旋蒸至近干，用6mL水溶解残渣，5mL×2次正己烷除脂，弃去正己烷层，取3mL水层待净化。
2、SPE柱净化
(1) 活化：HLB固相萃取柱使用前依次使用5mL甲醇和5mL水活化。
(2) 上样和洗脱：将待净化液加入已活化好的固相萃取柱中，以2mL/min的流速过柱，弃去滤液，用5mL水淋洗固相萃取柱，弃去淋洗液，抽干5min。用5 mL 5%氨化甲醇洗脱固相萃取柱，收集洗脱液。
(3) 重新溶解：洗脱液于45℃氮吹吹干，用1mL甲醇定容，0.22μm微孔滤膜过滤，供HPLC上机测试。
3、HPLC条件设备：Waters Alliance 2695
色谱柱：Welch Ultimate XB-C18 (4.6×250 mm, 5μm)
检测器：Waters 2487 紫外检测器
检测波长：224 nm
流动相：A：水B：乙腈
洗脱方式：等度洗脱
表1流动相等度洗脱条件
流速：1 mL/min
进样体积：20μL
六、实验结果
1、牛奶中氟苯尼考的5mg/kg添加回收结果
表2牛奶中氟苯尼考的5mg/kg添加回收结果
2、添加水平为5mg/kg牛奶中氟苯尼考残留物色谱图
图1添加水平为5mg/kg牛奶中氟苯尼考残留物色谱图
