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新型非洲猪瘟分析仪检验步骤

   2019-04-29 深圳市芬析仪器制造有限公司479
核心提示:新型非洲猪瘟分析仪检验步骤:检测前准备工作:1.请提前20分钟从冰箱中取出新型非洲猪瘟分析仪试剂盒,平衡至室温。2.从冰箱中取
 新型非洲猪瘟分析仪检验步骤:

检测前准备工作:

1.请提前20分钟从冰箱中取出新型非洲猪瘟分析仪试剂盒,平衡至室温。

2.从冰箱中取出的浓缩洗涤液可能有结晶,属于正常现象;放置室温,轻摇均匀,待结晶完全溶解后再配置洗涤液。可将20ml浓缩洗涤液用蒸馏水或去离子水稀释配置成400ml工作浓度的洗涤液,未用完的放回4℃

3.20×洗涤缓冲液的稀释:蒸馏水按1:20稀释,即1份20×洗涤缓冲液加19份蒸馏水。


实验所需自备试验器材:
1.新型非洲猪瘟分析仪(450nm)
2.高精度加样器及枪头:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
3.37℃恒温箱或水浴锅
4.蒸馏水或去离子水

新型非洲猪瘟分析仪样本处理及要求:
1. 血清:室温血液自然凝固10-20分钟,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如出现沉淀,应再次离心。
2. 血浆:应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂,混合10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应该再次离心。
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3. 尿液:用无菌管收集,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。
4. 细胞培养上清:检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。新型非洲猪瘟分析仪检测细胞内的成份时,用PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液,细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融,以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。

5.组织标本:切割标本后,称取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。分装后一份待检测,其余冷冻备用。
6. 标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融.
7. 不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。

新型非洲猪瘟分析仪操作步骤:
1.从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回4℃。
2.设置阴、阳性对照孔和样本孔,阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照各50μL;
3.新型非洲猪瘟分析仪待测样本孔加待测样本10μL,样本稀释液40μL;
4.随后阴、阳性对照孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗原100μL,用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
5.弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液,静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。
6.每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光水浴锅孵育15min。
7.每孔加入终止液50μL,15min内,在新型非洲猪瘟分析仪450nm波长处测定各孔的OD值。



 
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