酶抑制分光光度法介绍

       由农药残留快速检测仪生化检测法开发的速测卡法（酶抑制显色纸片法）和速测仪法（酶抑制分光光度法），前者在80年代在省级部门小范围使用过，后被后者取代。目前我省广泛使用农药残留检测方法主要有两大类—色谱检测法和速测仪法。色谱检测法用作农残定量分析，可为农药残留执法提供依据，主要分布在省级相关部门，部分地州也具有一定的检测能力。速测仪法只能作农残定性分析，但它具有短时间能够检测大量样本、检测成本低，对于检测人员技术水平要求低，易于在基层推广等特点，是目前我国控制高毒农药残留的一种有效方法，也是目前国内和我省应用为广泛的农药残留快速检测方法。广泛用于蔬菜、水果生产基地和批发市场等，主要用来防止有机磷和氨基甲酸酯类农药残留严重超标的蔬菜和水果流入市场。

        一、有机磷农药和氨基甲酸酯农药的作用机理

 

        有机磷和氨基甲酸酯类农药能抑制昆虫神经中枢和周围神经系统中乙酰胆碱酶的活性，造成神经传导介质乙酰胆碱的积累，影响正常传导，使昆虫中毒致死。如果有有机磷农药存在，有机磷农药就与胆碱酯梅结合，胆碱酯酶就不能分解乙酰胆碱为乙酸和胆碱，造成乙酰胆碱在神经肌接头和体内其它部位的过量积聚，引起一系列神经中毒症状。

 

      二、乙酰胆碱酯酶抑制法（酶法）的作用原理

 

        从生物化学的角度看，有机磷农药和氨基甲酸酯农药与乙酰胆碱是竞争性作用于胆碱酯酶的，即胆碱酯酶可以与乙酰胆碱结合，催化乙酰胆碱生成乙酰和胆碱，另一方面，如果胆碱酯酶与有机磷农药结合，就阻断了反应的进行。根据这个原理，就可以利用胆碱酯酶的催化反应的抑制法，设计一种通过颜色变化的直观的检测方法，来快速检测有机磷农药和氨基甲酸酯农药的残留情况。因此，生物化学法（酶法）就是利用某种酶受影响的程度来反映农产品中农药残留量。

 

        三、速测仪法（酶抑制分光光度法）方法原理

 

        乙酰胆碱酯酶水解后，水解产物可与显色剂反应产生颜色，有机磷和氨基甲酸酯类农药可以抑制乙酰胆碱酯酶的活性，使这种酶不能被水解，从而无显色反应。在溶液中加入乙酰胆碱酯酶和显色剂，用此判断有机磷和氨基甲酸酯类农药残留是否存在。在溶液中反应后，用分光光度计测定吸光值随时间的变化，计算出抑制率，以此判断蔬菜中含有机磷和氨基甲酸酯类农药残留的情况。

 

        四、速测仪法的优缺点：

 

        优点：在于简单方便，快捷、成本低廉。整个检测过程只需30分钟左右，它可以作为传统仪器分析方法的有益补充，针对市场、农场蔬菜农药残留量进行快速筛选监测，保证上市蔬菜食用的相对安全性。

 

缺点：酶试剂易失活，导致反应不稳定，检测结果误差较大，重复性不好，实际应用中的确认率大约为60%~70%左右；存在检测盲区，只能检测有机磷和氨基甲酸酯两类农药，不能检测有机氯类、菊酯和其它类别的剧毒农药；不适合检测葱蒜类、香菜、韭菜、番茄、胡萝卜、茭白、蘑菇、花椒等14种容易出现假阳性的农产品；需要对检测人员进行专门培训，否则将会对出现的问题无法正确处理或判断，得出错误的结果。