1.简介:
膳 食纤维是指碳水化合物及其相类似物质的总和,包括多糖、寡糖、木质素以及相关的植物物质。主要有纤维素、半纤维素、果胶及亲水胶体物质,如树胶、海藻多糖 等组分;另外还包括植物细胞壁中所含有的木质素;不被人体消化酶所分解的物质,如抗性淀粉、抗性糊精、抗性低聚糖、改性纤维素、黏质、寡糖以及少量相关成 分,如蜡纸、角质、软木脂等。
总膳食纤维检测试剂盒是根据AOAC991.43,AOAC 985.29,AACC32-07和AACC 32-05方法开发的,也适用于其它方法,如AACC Method 32-21,AACC method32-06。
2.检测原理
脱脂(如大于10%)干燥后的样品经热稳定a-淀粉酶、蛋白酶和淀粉葡萄糖苷酶酶解消化,酶解液通过乙醇沉淀、过滤,乙醇和丙酮洗涤残渣后干燥、称重,得到总膳食纤维(TDF)残渣;
酶解液通过直接过滤、热水洗涤残渣,干燥后称重,得到不溶性膳食纤维(IDF)残渣;
滤液用乙醇沉淀,过滤、干燥、称重,得到可溶性膳食纤维(SDF)残渣。
TDF、IDF和SDF的残渣扣除蛋白质、灰分和空白即得TDF、IDF和SDF含量。
该检测试剂盒的主要优势在于直接提供高纯度的酶,酶的活力是标准化的,而标准化的a-淀粉酶的活力在测量抗性淀粉是公认的。
淀粉葡萄糖苷酶中基本没有纤维素酶,而其他常用的酶制剂中常含有这种污染物,这将导致溶解和低估β-葡聚糖。
该试剂盒提供的酶都是稳定的液体,可以保存到试剂盒有效期,并且是直接应用液,不需要使用前再溶解。
3.用途
适用于检测谷物、水果、蔬菜和加工食品中的总膳食纤维(TDF)、不溶性
膳食纤维(IDF)和可溶性膳食纤维(SDF)的检测。
4.提供试剂及材料
每一个盒中的提供的酶试剂足够进行200个试验,如另外需要可单独订货:
Bottle 1,1瓶:
热稳定a-淀粉酶(20mL,~ 3,000 U/mL,Ceralpha method;~ 10,000 U/mL on
soluble starch。).
Bottle 2,1瓶:
纯化的蛋白酶(20mL,50 mg/mL; ~ 350 tyrosine Units/mL。)
Bottle 3,2瓶:
淀粉葡萄糖苷酶(20mL,3300 U/mL on soluble starch。)
总计:80ml(4瓶20ml包装)
另外,实验中需要用到硅藻土:
酸洗硅藻土Celite?545,100g或500g包装,(货号:G-CEL100,G-CEL500)
其他相关试剂盒:
膳食纤维质控试剂盒(货号:K-TSCK)
质控试剂盒用于检验酶的效力和纯度,含下表中所列物质每种一瓶,并附有技术数据单(K-TSCK),盒中每种物质足够10次测试用。
品种 | 数量 |
β-葡聚糖(大麦) | 1.0g |
高直链玉米淀粉 | 10.0g |
淀粉(小麦) | 10.0g |
酪蛋白 | 5.0g |
果胶 | 1.0g |
5.需要的设备和试剂
5.1设备
A.高型无导流口烧杯:400mL或600mL
B.坩埚:具粗面烧结玻璃板,孔径40-60 μm。清洗后在马福炉中525℃灰化6小时或过夜,用真空泵除去硅藻土和灰分,室温下用2%清洗液浸泡1小时,用水和蒸馏水冲洗干净,用15 mL丙酮冲洗后风干,加1g硅藻土到干燥的坩埚中,在130℃干燥至恒重,在干燥器中冷却1小时,记下坩埚(包括硅藻土)的重量。
C.真空溶剂过滤装置:真空泵或有调节装置的抽吸器,1L的抽滤瓶,侧壁有抽滤口,以及抽滤瓶配套的橡胶塞。用于酶解液的抽滤。
D.恒温振荡水浴:95-100℃
E.分析天平:感量0.1mg
F.天平(台秤):4 000g量程,感量0.1g
G.马福炉:525±5°C,
H.烘箱:103±2℃,130±3℃
I.真空干燥箱
J.干燥器:二氧化硅或等同干燥剂
K. PH计,具有温度补偿功能。
L.微量凯氏定氮仪。
M.移液器,50-200 μL,5 mL,一次性移液吸头。
N.计时器。
O.橡胶刮勺
P.磁力搅拌器
5.2试剂
A. 95%乙醇(体积比),
B. 78 %乙醇:取821mL95%乙醇置于容量瓶中,用水稀释到刻度,混匀。
C.丙酮
D.蒸馏水或去离子水
E.清洗液Micro (International Products Corp.,Trenton,NJ).,配成2%液体
F. MES/TRIS缓冲液(0.05mol/L):称取19.52g(MES) (Sigma, M 8250)和14.2 g
(TRIS)(Sigma,T1503)膳食纤维检测试剂盒是根据AOAC991.43,AOAC 985.29,AACC32-07和AACC 32-05方法开发的,也适用于其它方法,如AACC Method 32-21,AACC method32-06。
2. 检测原理
脱脂(如大于10%)干燥后的样品经热稳定a-淀FEN酶、蛋白酶和淀粉葡萄糖苷酶酶解消化,酶解液通过乙醇沉淀、过滤,乙醇和丙酮洗涤残渣后干燥、称重,得到总膳食纤维(TDF)残渣;
酶解液通过直接过滤、热水洗涤残渣,干燥后称重,得到不溶性膳食纤维(IDF)残渣;
滤液用乙醇沉淀,过滤、干燥、称重,得到可溶性膳食纤维(SDF)残渣。
TDF、IDF和SDF的残渣扣除蛋白质、灰分和空白即得TDF、IDF和SDF含量。
该 检测试剂盒的主要优势在于直接提供高纯度的酶,酶的活力是标准化的,而标准化的a-淀FEN酶的活力在测量抗性淀粉是公认的。淀粉葡萄糖苷酶中基本没有纤维素酶,而其他常用的酶制剂中常含有这种污染物,这将导致溶解和低估β-葡聚糖。该试剂盒提供的酶都是稳定的液体,可以保存到试剂盒有效期,并且是直接应用液,不需要使用前再溶解。
3. 用途
适用于检测谷物、水果、蔬菜和加工食品中的总膳食纤维(TDF)、不溶性
膳食纤维(IDF)和可溶性膳食纤维(SDF)的检测。
4. 提供试剂及材料
每一个盒中的提供的酶试剂足够进行200个试验,如另外需要可单独订货:
Bottle 1 ,1瓶:
热稳定a-淀FEN酶(20mL,~ 3,000 U/mL,Ceralpha method;~ 10,000 U/mL on
soluble starch。).
Bottle 2,1瓶:
纯化的蛋白酶(20mL,50 mg/mL; ~ 350 tyrosine Units/mL。)
Bottle 3,2瓶:
淀粉葡萄糖苷酶(20mL,3300 U/mL on soluble starch。)
总计:80ml(4瓶20ml包装)
另外,实验中需要用到硅藻土:
酸洗硅藻土Celite?545, 100g或500g包装,(货号:G-CEL100,G-CEL500)
其他相关试剂盒:
膳食纤维质控试剂盒(货号:K-TSCK)
质控试剂盒用于检验酶的效力和纯度,含下表中所列物质每种一瓶,并附有技术数据单(K-TSCK),盒中每种物质足够10次测试用。
品种 | 数量 |
β-葡聚糖(大麦) | 1.0g |
高直链玉米淀粉 | 10.0g |
淀粉(小麦) | 10.0g |
酪蛋白 | 5.0g |
果胶 | 1.0g |
5.1 设备
A. 高型无导流口烧杯:400mL或600mL
B. 坩埚:具粗面烧结玻璃板,孔径40-60 μm。清洗后在马福炉中525℃灰化6小时或过夜,用真空泵除去硅藻土和灰分,室温下用2%清洗液浸泡1小时,用水和蒸馏水冲洗干净,用15 mL丙酮冲洗后风干,加1g硅藻土到干燥的坩埚中,在130℃干燥至恒重,在干燥器中冷却1小时,记下坩埚(包括硅藻土)的重量。
C. 真空溶剂过滤装置:真空泵或有调节装置的抽吸器,1L的抽滤瓶,侧壁有抽滤口,以及抽滤瓶配套的橡胶塞。用于酶解液的抽滤。
D. 恒温振荡水浴:95-100℃
E. 分析天平:感量0.1mg
F. 天平(台秤):4 000g量程,感量0.1g
G. 马福炉:525±5°C,
H. 烘箱:103±2℃,130±3℃
I. 真空干燥箱
J. 干燥器:二氧化硅或等同干燥剂
K. PH计,具有温度补偿功能。
L. 微量凯氏定氮仪。
M. 移液器,50-200 μL,5 mL,一次性移液吸头。
N. 计时器。
O. 橡胶刮勺
P. 磁力搅拌器
5.2 试剂
A. 95%乙醇(体积比),
B. 78 %乙醇:取821mL95%乙醇置于容量瓶中,用水稀释到刻度,混匀。
C. 丙酮
D. 蒸馏水或去离子水
E. 清洗液Micro (International Products Corp.,Trenton,NJ).,配成2%液体
F. MES/TRIS缓冲液(0.05mol/L):称取19.52g (MES) (Sigma, M 8250)和14.2 g
(TRIS) (Sigma,T1503),用1.7L蒸馏水溶解,用6mol/L氢氧化钠调节PH至
8.2±0.1,加水稀释到2L(注意24℃时PH值为8.2,20℃时PH值为8.3,27-28℃
时PH值为8.1)
G. 盐酸溶液(0.561 mol/L):取93.5mL 6 mol/L的盐酸,加入700mL水中,混匀
后用水定容到1L。
H. 氢氧化钠
I. PH值标准缓冲液:PH值为 4.0,7.0 和10.0。
6. 酶的纯化和标准化
6.1 根据AACC/AOAC的膳食纤维检测方法,必须确保酶的纯度。
6.1.1 淀粉葡萄糖苷酶被木聚糖酶、纤维素酶和果胶酶污染,会低估β-葡聚糖、
阿拉伯木聚糖和果胶的含量。
6.1.2 热稳定a-淀粉酶被污染,会影响抗性淀粉的测量。
6.1.3 蛋白酶被4-β-葡聚糖酶污染,会低估β-葡聚糖的含量。
6.1.4 如不是使用该的酶,请参考下面方法测定
上海惠诚生物优势品牌系列:
药物: TRC LGC USP LKT
植提标准品: Extrasynthese PhytoLab Chromadex CaroteNature
糖类: Elicityl TDB Ludger Megazyme Glycarbo
脂类: Nu-Chek Larodan Avanti Matreya
其他: TCI ERM Wako Jackson Cayman laysan Alfa 阿拉丁 麦克林
手机微信:18018625233(同微信) QQ:2303607288
责权声明:
①本版块的所有文章及图片均为客户自行编辑,其版权为客户所有,客户需保证其编辑的文章及图片均无侵犯任何第三方的合法权益,如被第三方维权,由客户承担全部责任;
② 本网站仅为展示平台,如要转载,请与我网站联系协助获得授权;
③发布内容如有侵权,请及时联系我网站进行删除。
※ 联系电话:400-854-6788