iStop技术基于CRISPR单碱基基因突变技术CBE（CRISPR-dependent cytosine base editor）（1）。CBE技术在不依赖DNA双链断裂的前提下，特异性实现基因组C>T碱基突变，将CBE技术应用于基因敲除时，可以实现精确地将四个密码子（CAA、CAG、CGA 和 TGG）转换为终止密码子（TAA、TAG、TGA）（图1）。
目前主要的CRISPRCas9基因敲除方法主要有邻端连接法（NHEJ）和重组修复法（HR）两种。二者均依赖Cas9蛋白切割造成基因组DNA双链断裂后的修复反应。而DNA双链断裂是严重的DNA损伤，激活DNA损伤检测，导致细胞死亡。Cas9蛋白的非特异切割也会引起基因组非靶点位置的双链断裂，从而导致非特异性的DN**段丢失。iStop基因敲除不会产生DNA双链断裂，避免了产生激烈的DNA损伤应激，基因敲除过程温和可控。
定点突变基因敲除细胞株优点：
1)敲除过程中不引起DNA双链断裂，不会引起细胞应激导致状态改变或者大片段DNA缺失等不可控突变。
2)对细胞的干扰。细胞遗传背景清晰。
3)不残留抗性基因等筛选标签。
1、iStop基因敲除CRISPRCBEmax载体
CRISPRCBEmax载体表达Cas9单链切割突变体和CBE酶，实现细胞基因组定点C>T突变。需配合sgRNA表达载体使用。
| CR3200-1 | pCBE4max-Cas9nick(2A)puro |
| CR3200-2 | pCBE4max-Cas9nick-spG(2A)puro |
| CR3200-3 | pCBE4max-Cas9nick-spRY(2A)puro |
2、sgRNA表达载体
经过细胞基因敲除实验验证的iStop基因基因敲除载体。具体请咨询客服。
3、iStop基因敲除细胞株
经过基因组PCR测序或者测序+WB验证的iStop基因敲除细胞株。
| 货号 | 名称 | 敲除基因ID | 细胞 | 敲除方法 | 验证 |
| CR3220-1 | CD274基因敲除HEK293V细胞株 | 29126 | HEK293V | iStop | 测序 |
| CR3220-2 | CD274基因敲除MDA-MB-231细胞株 | 29126 | MDA-MB-231 | iStop | 测序 |
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