1、检测试剂(酶试剂)制备:
1) 缓冲液:将缓冲液试剂袋中的试剂倒出,溶于500ml 蒸馏水中,溶解、混匀即可。
2) 底物;向标有“底物”的试剂瓶中加入2.7 ml 蒸馏水,溶解、混匀即可。0~5oC环境下冷藏保存。
3) 显色剂:按试剂瓶上的标签说明,向标有“显色剂”的试剂瓶中加入26 ml 缓冲液,溶解、混匀即可。
4) 酶试剂:酶试剂已配成溶液可直接使用。平常要在0~5oC环境条件下冷藏保存,切勿冷冻至结冰!!!
[备注]“酶试剂使用前请摇晃均匀。使用时用一瓶取一瓶,用完再取用新的,要防止其它物质的污染,以免溶液中毒失效,未用完的试剂可放在清洗干净的反应瓶中0~5oC环境条件下保存。反应瓶建议用去污粉清洗,尽可能不用洗洁精清洗。(去污粉可在一般的日杂商站或医药化学试剂商店买到。)
5)试剂使用过程中防止污染应遵循的原则:
a.器具原则:所有用于转移试剂或样品的器具都要并帖上标记,以免混用而造成交叉污染。
b.试剂“只出不进”原则:每次测试时,从试剂瓶中吸出(抽取)的试剂不管是否使用,只要吸出来了,即便用不上或用不了造成浪费也不要打回去。否则,容易污染整瓶试剂造成更大损失,甚至影响以后所有的测试,产生错误的测试数据。
2、样品前处理及对照液、检测样品液的制备:
1) 对照液的制备:取酶100ul,缓冲液2.5ml,加入反应瓶中,混匀,再加入显色剂100ul,底物20ul。摇匀后立即转移到比色皿中,放入仪器进行对照测试。
2) 检测样品液的制备:
a.取2g茶叶样品放入三角瓶中,加入10ml缓冲液, 振荡提取2分钟后过滤,取出清液即为待测试液。
b.取酶100ul,待测试液2.5ml,加入反应瓶中,混匀静置抑制10分钟后,(按仪器显示的时间计时)加入显色剂 100ul,底物 20ul 。摇匀后立即转移到比色皿中
3、空白对照测量:
步:按下“100%”键;
第二步:打开仪器门盖,将装有对照液的比色皿放入指定的通道中,盖好仪器门盖,按下“对照”键,屏幕左下角显示测量时间;
第三步:空白对照检测结束后,仪器自动显示空白样品对照测试结果Ao,打开仪器门盖,取出对照。
[备注]:
a.当空白对照值在0.15-0.3之间时,可继续做实验;
b.当空白对照值在<0.15时,要重新做空白对照,若连续做的空白对照值在<0.15时,必须更换酶试剂。
c.当空白对照值在>0.3时,要调试减少仪器的测量时间,重新做空白对照。
4、 样品测量:
步:按下“100%”键;
第二步:打开仪器门盖,将装有样品液的比色皿放入指定的通道中,盖好仪器门盖,按下“样品”键;
第三步:检测结束后,仪器自动显示指定通道农药残留检测样品的检测结果Ai,仪器自动保存对照值和检测结果,打开仪器门盖,取出样品。
5、结果判断:
样品的抑制率在40~50%之间为可疑农残超标样品,抑制率大于50%为农残超标样品,表明被测样品的农药残留毒性可能超过安全的界定标准,建议用气相色谱等仪器分析法作进一步的确认。
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