一、检测原理：本试剂盒采用竞争ELISA，在微孔板上预包被黄曲霉毒素B1 抗原，加入样本/黄曲霉毒素B1 标准品溶液及辣根过氧化物酶标记的黄曲霉毒素B1 抗体。样本或标准品溶液中的黄曲霉毒素B1 与预包被在微孔板上的黄曲霉毒素B1 抗原竞争结合辣根过氧化物酶标记的黄曲霉毒素B1 抗体。未结合的酶标抗体在洗涤时被除去。再加入TMB 显色液，读取吸光值。样本的吸光值与其所含残留物黄曲霉毒素B1 抗原的含量成负相关。对照标准曲线，即可得出相应残留物黄曲霉毒素B1 的含量。
二、检测范围
本试剂盒是应用ELISA 技术研发的药物残留检测产品,与仪器分析技术比较，能经济、快速地检测出玉米、大米、麦类、豆类、花生、饲料、食用油等样本中的黄曲霉毒素B1。
三、试剂盒组成:酶标板1 块，96 孔/板
标准液6 瓶（1 mL/瓶）：0 ppb,0.1 ppb,0.3 ppb,0.9 ppb,2.7 ppb，8.1 ppb
酶标记物…………………6mL 底物液A ………………7mL
底物液B…………………7mL 终止液…………………7 mL
10×浓缩洗涤液………40mL 7×浓缩样品稀释液………20mL
说明书… … … … …1 份
四、使用单位需自备的设备及试剂
（1）仪器：微孔板酶标仪(450 nm/630 nm);离心机；粉碎机；电子天平（感量0.01 g）
（2）器材；单道微量移液器：20 μL～200 μL，100 μL~1000 μL
多道微量移液器：30 μL～300 μL
（3）试剂：甲醇、去离子水
五、溶液的配制
样本前处理需配制：
配液1：样品稀释液：将浓缩样品稀释液用去离子水按1:6 体积比进行稀释（1 份浓缩样品稀释液+6 份去离子水）。
配液2：洗涤工作液：将浓缩洗涤液用去离子水按1:9 体积比进行稀释（1 份浓缩洗涤液+9 份去离子水）。
六、样本前处理方法
样本处理前须知：处理任何样本时，都须注意：
（1）实验中必须使用一次性吸头，在吸取不同的试剂时要更换吸头。
（2）实验前须检查各种实验器具是否干净，须使用洁净实验器具，以免污染干扰实验结果。
样本前处理步骤：
（A）饲料（半成品、成品等）
1. 取1g 粉碎的样品与10mL 纯甲醇混合均匀；2. 强力振荡3min；3. 4000r 离心5min；
4. 取上层清液200μL，加入800μL 样品稀释液，混合均匀；5. 取50μL 稀释后液体待测。
稀释倍数：50
（B）谷物（大米、小米、玉米、小麦）
1. 取1 g 粉碎样品，加入4 mL50%甲醇-水混合均匀；2. 充分振荡混匀3-5 min；
3. 4000 r/min 离心5min，或用定量分析滤纸过滤；
4. 取400μL 离心后的上清液或过滤后的滤液加入到600μL样品稀释液中进行稀释并充分混匀； 5. 取50 μL 稀释后的样品待测。稀释倍数：10
七、酶联免疫检测步骤: 测定前须知
1、使用之前将所有试剂和需用微孔板回升至室温。2、使用之后立即将所有试剂放回2~8 ℃。
3、在使用中不要让微孔干燥。4、在ELISA 分析中的重复性，很大程度上取决于洗板的一
致性，正确的洗板操作是ELISA 测定程序中的要点。5、在所有恒温孵育过程中，避免光线照射，用盖板膜盖住微孔板。
测定步骤：
1、将所需试剂和微孔板从冷藏环境中取出，在室温下平衡30 min，每种液体使用前均须摇匀。注意标准液均需做2个平行试验。
2、加标准品：加标准品/样本50 mL 到对应的微孔中，再加入酶标记物50 mL/孔，轻轻振荡混匀，用盖板膜盖板后置室温(25℃)避光反应15 min。
3、洗板：小心揭开盖板膜，将孔内液体甩干，加洗涤液250μL/孔，每次浸泡15 s，充分洗涤3 次，用吸水纸拍干。
4、显色：加入底物液A 液50 μL/孔，再加底物液B 液50 μL/孔，轻轻振荡混匀，用盖板膜盖板后置室温(25℃)避光环境反应10 min。
5、测定：每孔各加50 μL 终止液，设定酶标仪在450 nm 处，测定OD 值（建议用450/630 nm 双波长检测，在5 min内读完数据）。
八、结果分析
所测得的标准液或样品吸光度的平均值（B）除以个标准液（0 标准液）的吸光度（B0）值再乘以，得到百分吸光度值。百分吸光度值（%）＝ B÷B0×以标准品浓度的10 为底的对数为X 轴， 百分吸光值为Y 轴，绘制标准曲线。将样本的百分吸光值代入标准
曲线，从标准曲线上读出样本所对应的值，作为10 的幂，乘以稀释倍数，即为样品中所含黄曲霉B1 的量。
利用试剂盒专业分析软件进行计算，更便于大量样品的准确、快速分析。
九、试剂盒灵敏度、准确度、精密度
试剂盒灵敏度：0.1 ppb
样本检测限：饲料……………5ppb 谷物……………1ppb
回收率：饲料……………83±15% 谷物……………85±15%
精密度：试剂盒的变异系数均小于10%
十、注意事项
1、室温低于20 ℃或试剂及样本没有回到室温（20-25 ℃）会导致所有标准的OD 值偏低。
2、在洗板过程中如果出现板孔干燥的情况，则会出现标准曲线不成线性，重复性不好的现象，所以洗板拍干后应立即进行下一步操作。
3、反应终止液为2M 硫酸，避免接触皮肤；若不慎滴漏到皮肤上，请尽快用水冲洗。
4、不要使用过了有效日期的试剂盒；也不要使用过了有效期的试剂盒中的任何试剂，掺杂使用过了有效期的试剂盒会引起灵敏度的降低；不要交换使用不同批号试剂盒中的试剂。
5、保存试剂盒于2~8 ℃，不要冷冻，将不用的微孔板放进自封袋重新密封；标准物质和无色的发色剂对光感，因此要避免直接暴露在光线下。
6、显色试剂有任何颜色表明发色剂变质，应当弃之；0标准的吸光度（450 nm）值小于0.5（A450nm< 0.5）时，表示试剂可能变质。
7、在加入底物液后，一般显色10 min 即可。若颜色较浅，可延长反应时间到15 min（或更长），但不得超过30 min；反之，则减短反应时间。
8、该试剂盒反应温度为25 ℃，温度过高或过低将导致检测吸光度值和灵敏度发生变化。
十一、贮藏条件：在2~8 ℃保存试剂盒。 保存期：本试剂盒有效期为12 个月
另有黄曲霉毒素M1酶联免疫试剂盒96孔48孔，呕吐毒素酶联免疫试剂盒，玉米赤霉烯酮酶联免疫试剂盒，玉米赤霉醇酶联免疫试剂盒......
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