【产品名称】
通用名称：MS2过程控制试剂盒（RT-PCR探针法-50℃）
英文名称：MS2 Process Control Real Time RT-PCR Kit
【包装规格】
货号：LR73141 - 96T
【产品介绍】
采用实时荧光PCR技术，针对MS2特异性基因设计引物和探针。PCR扩增过程中，与模板结合的探针被Taq酶分解产生荧光信号，荧光定量PCR仪根据检测到的荧光信号绘制出实时扩增曲线，从而实现对病毒检测过程中的过程控制监测。
【适用范围】
适用于食品中病毒检测的过程控制监测。
【检测灵敏度】
10 ~100 copies/test。
【适用仪器】
荧光定量PCR仪，具有能够检测FAM标记的荧光通道。
【注意事项】
1、实验前请仔细阅读说明书，规范操作。
2、本品各组成成分均不得与其他产品或不同批号产品中的相应组成成分进行混用。
3、基因变异可能会导致假阴性结果。
4、实验室环境污染、试剂污染、样品交叉污染都可能会造成假阳性结果。
5、恰当处理实验过程中的废弃物和扩增产物。
【检测方法】
1、病毒富集
在样品中加入10μL MS2过程控制后，进行病毒富集。
2、病毒裂解及RNA提取
病毒RNA可手工提取和纯化，也可使用商品化的病毒RNA提取纯化试剂盒。
3、过程控制准备
取20μL MS2过程控制，于95℃加热5min后在冰上冷却至室温。按照1:9的比例使用标准物质稀释液进行梯度稀释（做3个稀释梯度），一共4个浓度，用于制作过程控制标准曲线。
4、反应体系配置
从试剂盒中取出MS2预混液与MS2酶混合液，充分融化，短暂离心。
按照下表等比例配置反应体系，取20μL置于PCR管或PCR板中，然后将对照及其它模板各取5μL分别加入PCR管或PCR板中，盖好管盖或板膜，短暂离心后立即进行PCR扩增反应。
| 组分 | 用量 |
| MS2预混液 | 19μL |
| MS2酶混合液 | 1μL |
| 总体积 | 20μL |
5、PCR扩增
PCR管或PCR板置于PCR仪上，推荐反应程序设定如下：反应体系为25μL，在第三步每个循环60℃时检测荧光信号，检测通道选择FAM（反转录温度设定可以从42℃到50℃）。
| 步 | 第二步 | 第三步 | ||
| 1次 | 1次 | 45个循环 | ||
| 42-50℃ | 95℃ | 95℃ | 60℃√ | 65℃ |
| 30min | 5min | 15s | 30s√ | 30s |
注：使用ABI系列PCR仪器，如果不添加ROX，“passive reference”和 “quencher”均选择“none”。
6、标准曲线绘制
以未稀释和梯度稀释的过程控制病毒的浓度lg值为X 轴（设过程控制病毒原液浓度为1），以其Ct 值（部分PCR仪显示为Cq）为Y 轴，绘制过程控制标准曲线。
7、质量控制
满足以下条件本次检测有效：
1）空白对照和阴性对照无扩增曲线；
2）过程控制标准曲线R2≥0.98；
3）提取效率≥1%；
注：设样本经过前处理后获得的液体体积为V1，从V1中取出进行RNA提取的液体体积为V2，终溶解或洗脱RNA时使用的液体体积为V3。将MS2初始浓度设为1，假设样品RNA提取液外加扩增控制的抑制指数小于2，实际样本检测时MS2的Ct值在标准曲线上对应的浓度为C，则提取效率=(C×V1×V3)/(10×V2×1)。
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