微量法
注意:正式测定之前选择2-3 个预期差异大的样本做预测定。
产品内容:
缓冲液:液体8mL×1 瓶,4℃保存。
试剂一:液体8mL×1 瓶,4℃保存。
试剂二:液体4mL×1 瓶,4℃保存。
试剂三:液体4mL×1 瓶,4℃保存。
试剂四:液体10mL×1 瓶,4℃避光保存。
产品说明:
几丁质主要存在于虾、蟹、昆虫等甲壳类动物的外壳与软体动物的器官(例如乌贼的软骨),以及真菌类的细胞壁中,而几丁质酶(EC 3.2.1.14)可催化几丁质水解,具有抵御真菌侵染的作用,成为抗真菌病害的研究热点。
几丁质酶水解几丁质产生N-乙酰氨基葡萄糖,进一步与对二甲氨基苯甲醛产生红色化合物,在585nm 处有特征吸收峰,吸光值增加速率反映了几丁质酶的活性。
需自备的仪器和用品:
天平、水浴锅、离心机、震荡仪、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板,甲苯、蒸馏水。
操作步骤:
一、样品处理
新鲜土样风干,过40 目筛。
二、测定操作表
| 对照管 | 测定管 |
土样(g) | 0.02 |
|
甲苯(μL) | 10 |
|
混匀,25℃静置15min | ||
缓冲液(μL) | 120 | 40 |
试剂一(μL) |
| 80 |
混匀,37℃震荡培养1h,8000rpm,4℃,离心10min,取上清100μL | ||
试剂二(μL) | 40 | 40 |
混匀,沸水浴7min | ||
试剂三(μL) | 40 | 40 |
试剂四(μL) | 100 | 100 |
混匀,37℃水浴30min,取200μL 于微量石英比色皿/96 孔板中,蒸馏水调零,测定585nm处吸光值,记为A 对照管和A 测定管,ΔA=A 测定管-A 对照管。 |
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