分光光度法
注意:正式测定之前选择 2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义
硅元素是一种十分重要的植物营养元素,土壤中有效硅含量影响着植物的光合作用、呼吸作用以及对逆境的抗性。
测定原理
硅酸根与钼酸铵在弱酸条件下生成硅钼酸,可被还原剂还原成硅钼蓝,在 700nm 有特征吸收峰。
自备实验用品及仪器
天平、常温离心机、恒温水浴锅、可见分光光度计、1 mL 玻璃比色皿、震荡仪。
试剂组成和配制
提取液:液体 55mL×1 瓶,4℃保存。
试剂一:液体 10mL×1 瓶,4℃保存。
试剂二:液体 10mL×1 瓶,4℃保存。
试剂三:液体 10mL×1 瓶,4℃保存。
试剂四:粉剂×1 瓶,4℃避光保存。临用前加入10mL试剂四溶剂充分溶解。
试剂四溶剂:液体 10mL×1 瓶,4℃保存。
样本处理
新鲜土样风干,过20目筛,按照土壤质量(g):提取液体积(mL)为1:5的比例(建议称取约0.2g土样,加入1mL提取液),振荡提取 1h,10000g ,25℃离心 10min,取上清液待测。
测定操作表
| 空白管 | 测定管 |
样本(μL) |
| 200 |
提取液(μL) | 200 |
|
试剂一(μL) | 200 | 200 |
混匀,35℃,15min | ||
试剂二(μL) | 200 | 200 |
混匀,25℃,10min | ||
试剂三(μL) | 200 | 200 |
试剂四(μL) | 200 | 200 |
充分混匀,25℃静置 30min | ||
于 1mL 玻璃比色皿,蒸馏水调零,测定 700nm 处吸光值 A,分别记为 A 空白管和 A测定管,△A=A 测定管-A 空白管 |
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