产品简介
RIDASCREEN® Histamin（订货号：R1604）组胺检测试剂盒，采用竞争性酶联免
疫法，定量检测食品中的组胺含量。
试剂盒中含有酶联免疫检测所需的所有试剂，包括标准品。
试剂盒足够进行 48次检测（包括标准测定）。
定量分析需要使用微孔板酶标仪。
样品处理： 不同的样品有不同的处理方法（参见 8.）
检测时间： 样品制备（以 10 个样品为例） ....................... 约15 分钟
检测过程（孵育时间）......................................... 90 分钟
检测限： 汽酒、白葡萄酒、红酒样品 ................................ 250 ppb
奶类样品 ............................................................. 100 ppb
奶酪、鲜鱼、罐头鱼样品 ................................... 2.5 ppm
鱼粉样品 ............................................................ 100 ppm
回收率： 汽酒、白葡萄酒、红酒样品 .................................... 95 %
奶类样品 ............................................................... 109 %
奶酪、鲜鱼、罐头鱼样品 ...................................... 100 %
鱼粉样品 ................................................................. 96 %
特异性： N -酰基-组胺 ......................................................... 100 %
N -甲基-组胺 .................................................... 约0.01 %
5 -羟基吲哚乙酸 ............................................. 无交叉反应
咪唑乙酸 ..................................................... 无交叉反应
L -组氨酸 ....................................................... 无交叉反应
N -甲基咪唑乙酸 ............................................ 无交叉反应
血清素 ...................................................... 无交叉反应
使用标记：
试剂盒中含有用于多次检测（n 次）的
物质
制造商
储存温度 批号
有效至 成分
在使用前请阅读说明书 编号
仅用于体外检测 用于复溶
冻干粉（剂）
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1. 用途
RIDASCREEN® Histamin 组胺检测试剂盒，采用竞争性酶联免疫法，定量检测红/
白葡萄酒、汽酒、奶类、奶酪、鲜鱼、罐头鱼和鱼粉产品中的组胺。
2. 概要
组胺是因在富蛋白质的食品，如鱼、奶酪、肉、汽酒，葡萄酒及啤酒中的某些细菌
在生长过程中分解了组氨酸而产生的。组胺的含量取决于细菌的种类，温度及其作
用时间等因素，高时可能超过1000 ppm（mg/kg）。鱼内含有大量的组胺，因此常
引至所谓的“鲭鱼中毒”现象。为降低鱼中出现组胺的机率，人们采取了很多质量控
制方法。使用好的质控方法可以使鱼内的组胺控制在10 ppm 以下。组胺的“缺陷行
动水平”（DAL）指为50 ppm。（P.L. Rogers, Journal of Aquatic Food Product
Technology, Vol. 9 (2) 2000, p. 5 - 17）。
在瑞士，葡萄酒内组胺的限量值为 10 mg/l（FIV）。
3. 检测原理
在样品处理后，先用酰化试剂将样品中的组胺衍生为 N-酰基组胺。通过竞争酶联免
疫反应，游离的酰化组胺和包被的组胺竞争抗体的结合位点。
洗板后加入过氧化物酶标记的二级抗体（酶连接物），于组胺抗体结合形成复合
物。没有结合的酶连接物在洗涤步骤中被除去。将底物和发色剂加入孔中并孵育。
酶连接物将发色剂转化为蓝色的产物。加入反应终止液后使颜色由蓝色转变为黄
色。在450 nm 处测量。吸光度值与样品中的组胺浓度成反比。
4. 试剂盒组份
每一个盒中的试剂足够进行 48 个试验（包括标准测定），盒中的组份如下：
样品酰化试剂：
1 x 酰化板（未被包被）96 孔
48 x Acylation tubes 试管（塑料），用于酰化反应
6 x Standard 1-6 组胺标准品，（每瓶4 ml）
0 ppb，0.5 ppb，1.5 ppb，5 ppb，15 ppb，50 ppb
1 x 质控 1（4 ml），浓度见瓶标签
1 x 质控 2（4 ml），浓度见瓶标签
1 x 酰化试剂（1.5 ml），即用型
1 x 酰化缓冲液（11 ml），即用型
提示：试剂盒中不含有酰化稀释液
酶联免疫试剂：
1 x 微孔板，48 孔，（6 条每条8 孔）包被有组胺
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1 x 酶连接物（6 ml）
过氧化物酶标记的抗体，即用型
1 x 组胺抗体液（6 ml），即用型
1 x 底物/发色剂（6 ml）含有四甲基对二氨基联苯，即用型
1 x Stop solution 反应终止液（11 ml）含0.5 N 的硫酸，即用型
1 x Washing buffer 洗涤缓冲液（20 ml），25 倍浓缩液
5. 另需的试剂和设备
5.1. 设备：
−微孔板酶标仪（450 nm）
−粉碎机，研钵或者均质器
−离心机和离心管
−可调式 20 μl - 200 μl 和200 - 1000 μl 微量移液器
5.2. 试剂：
−蒸馏水或去离子水
−用于奶类样品：10 mM PBS，0.05 % Tween 20（例如Sigma 公司，订货号
P3563）
6. 储存条件
保存试剂盒于 2 - 8 °C，不要冷冻。
将不用的微孔板放进原锡箔袋中并且与提供的干燥剂一起重新密封储存于2 - 8 °C
条件下。
底物/发色剂对光敏感，因此要避免直接暴露在光线下。
对过了有效期（见试剂盒外标签 ）的试剂盒不再提供任何质量保证。
不能交叉使用不同批号的盒中试剂。
7. 试剂变质的迹象
−底物/发色剂在使用前颜色变蓝
−标准品 1 的吸光度值小于0.9（E450 nm < 0.9）
8. 样品处理
为避免污染，试管或者酰化板只使用一次。
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8.1. 汽酒、白葡萄酒、红酒样品
− 20 μl 葡萄酒样品用10 ml 蒸馏水稀释
− 100 μl 每试管或者每酰化板孔进行检测
8.2. 奶类样品
− 4 ml 奶类样品离心10 min / 3000 g 在室温（20 - 25 °C），去脂
−取 20 μl 脱脂奶类样品和4 ml PBS 缓冲液（参见5.2.）混合
−取 100 μl 每试管或者每酰化板孔进行检测
8.3. 奶酪、鱼（鲜鱼和罐头鱼）样品
− 10 g 样品均质
−取其 1 g 均质样品中加入9 ml 蒸馏水，充分混合
−离心 5 min / 2500 g 在室温（20 - 25 °C）
−去除脂肪层
−取 1 ml 上清液中加入9 ml 水并充分混合
−取其 200 μl 溶液用9.8 ml 蒸馏水稀释
−取 100 μl 每试管或者每酰化板孔进行检测
8.4. 鱼粉样品
− 1 g 鱼粉样品中加入200 ml 蒸馏水，混合15 分钟
−取部分离心 5 min / 2500 g 室温（20 - 25 °C）
−取 200 μl 上清液用200 ml 蒸馏水稀释
−取 100 μl 每试管或者每酰化板孔进行检测
9. 检测步骤
9.1. 检测前的准备
使用之前将所有试剂回温至室温（20 - 25 °C）。
洗涤缓冲液为25 倍浓缩液，对洗涤缓冲浓缩液（20 - 25 °C）在使用前按比例1:25
（1+24）用蒸馏水稀释（例如：20 ml 缓冲液浓缩液 + 480 ml 蒸馏水）。稀释后的
缓冲液在2 - 8 °C 条件下可保存约4 周。
酰化试剂为即用型，其凝固点为18.5 °C。酰化试剂在使用是必须为液体，所以应
储存于室温条件下（20 - 25 °C）或在使用前回温至室温（20 - 25 °C）。
9.2. 酰化过程
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小心吸取，避免飞溅
1. 所有标准品、质控和样品均应进行两次平行实验。酰化板只使用其48 孔（不要
96 孔全部使用），因为酶联免疫微孔板只有48 孔。记录标准品和样品的位
置。
或者：取必需的试管插入酰化板中作为反应容器。
2. 向每一个酰化孔或试管中加入100 μl 标准品、质控和处理过的样品。
3. 向每一个试管/酰化孔中加入25 μl 酰化试剂。
4. 向每一个试管/酰化孔中加入200 μl 酰化缓冲液，充分混合后在室温条件下（20
- 25 °C）孵育15 分钟。
5. 每孔取25 μl 用于酶联免疫分析。
9.3. 酶联免疫分析过程
小心吸取，避免飞溅。仔细洗板非常重要。避免在操作过程中微孔出现干燥。
1. 将足够标准品和样品检测所需数量的孔条插入微孔板架，均做两个平行实验，
记录下标准品和样品的位置。
2. 向每个微孔中加入25 μl 酰化标准品及质控和处理好的样品。
3. 向每一个微孔中加入100 μl 组胺抗体溶液，充分混合，在室温条件下（20 -
25 °C）继续孵育40 分钟。
4. 倒出孔中的液体，将微孔板架倒置在吸水纸上拍打（每轮拍打3 次）以保证完
全除去孔中的液体。每孔加入250 μl 洗涤缓冲液（参见9.1.）洗涤微孔。上述
操作重复进行两遍。
5. 向每一个微孔中加入100 μl 酶连接物溶液，充分混合，在室温条件下（20 -
25 °C）孵育20 分钟。
6. 倒出孔中的液体，将微孔板架倒置在吸水纸上拍打（每轮拍打3 次）以保证完
全除去孔中的液体。每孔加入250 μl 洗涤缓冲液（参见9.1.）洗涤微孔。上述
操作重复进行两遍。
7. 向每一个微孔中加入100 μl 底物/发色剂，充分混合后在室温（20 - 25 °C）条
件下暗处孵育15 分钟。
8. 向每一个微孔中加入100 μl 反应终止液，充分混合。在加入反应终止液后10
分钟内于450 nm 处测量吸光度值。
10. 结果评估
请使用 R-Biopharm 德国拜发公司专门为RIDASCREEN® 系列产品设计的应用软件
RIDA® SOFT Win（订货号：Z9999）来进行结果分析。
关于标准曲线请参看试剂盒中附带的质保证书。
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通过标准曲线上对应的吸光度值，可得到组胺的浓度μg/kg（ppb）。此浓度必须乘
以对应的稀释倍数。稀释倍数和样品处理过程有关，见下表。
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