执行标准:GB/T 5009.199-2003
一、试剂配置缓冲液:取一包用510ml蒸馏水摇匀溶解后常温备用。
底 物:取一瓶加入5.2ml蒸馏水摇匀溶解,用时取100μl,配制后0-5℃冷藏保存。
酶 液:取一瓶加入5.2ml缓冲液摇匀溶解,用时取100μl,配制后0-5℃冷藏保存。
显色剂:取一瓶加入16ml缓冲液摇匀溶解, 用时取100μl,配制后0-5℃冷藏保存。
二、检测样本制备
1、取有代表性的蔬菜除去泥土,用天平称取1g,叶菜取叶片部分,瓜果取皮2g。
2、将菜样剪成1cm见方大小置于小烧杯内,加入5ml缓冲液,震荡1~2分钟。
3、将烧杯中的提取液倒入试管内,静置3~5分钟,再用移液管吸取上清液2.5ml移入另一试管内,即为样本提取液。
三、测试
取一支试管加入2.5ml缓冲液作为空白对照,然后与各个样本提取液的试管分别依次加入酶 液 100ul、显色剂 100ul摇匀,37度水浴放置15分钟底物100ul摇匀后马上倒入比色皿中然后立即放仪器,进行检测操作。
注:空白对照的吸光值之差△AO应≥30(即0.3);
当室温大于20℃时,可无需水浴培养,室温放置即可。
四、结果判定
抑制率<50%时判定为合格;抑制率≥50%时农药残毒超标,必要时可进行定量检测。
六、注意事项
1、试剂使用时,用一瓶配制一瓶,用前应摇匀;
2、试剂应避免交叉污染,吸出后的试剂不可再打回瓶内;
3、酶配制后经常用但10天内用不完的,建议分装为两瓶保存,其中一瓶可避免反复冷热交替而降低酶的活性。
4、配制前均为冷冻保存,有效期18个月(0-5℃冷藏保存为12个月)。
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