闪电克隆试剂盒

 闪电克隆试剂盒Lightening Cloning KitComponents BDIT0014-5 BDIT0014-10 BDIT0014-20Lightening Cloning Master Mix (2×) 1×25 μl (5次) 2×25 μl (10次) 4×25 μl (20次)介绍不同于普通分子克隆方法，闪电克隆试剂盒通过简单的体外一步（同源重组）实现DNA克隆。该方法极大简化了克隆过程，无论是单链DNA，还是大到几百kb的DNA片段，均可以高效完成克隆构建。只需将载体质粒线性化，再用PCR法将与载体质粒同源区（约15bp）导入插入片段（Inserts）两端，混合后加入重组酶，即完成质粒构建。该方法可以一步实现超过达10个插入片段按顺序同时插入载体质粒中。特点1. 比传统克隆方法更简单，步骤更少，试剂需求也少，整个流程时间更短。2. 可同时插入多个插入片段，无需寻找合适的酶切位点。3. PCR产生的片段无需酶切，线性化载体可以通过酶切或PCR方法产生。4. 重组产生的DNA接头处不引入任何多余碱基，有利于融合蛋白或核糖体结合位点RBS的构建。5. 可用于将线性化DNA重新连接成环状，适合定点突变操作。6. 只要是可以PCR的DNA片段，均可用该克隆试剂盒。7. 插入n个DNA片段与一个片段所花费的时间是一样的。保存-20℃。避免反复冻融，请酌情分装保存。闪电克隆流程1. 设计用于扩增插入片段（和/或载体质粒）的引物序列，引物上携带合适的重叠序列。2. 用高保真聚合酶PCR扩增插入片段。3. 用高保真酶PCR扩增（或酶切）将载体质粒线性化。4. 测定插入片段和线性化载体的浓度。5. 将插入片段和线性化载体加入Lightening Cloning Master Mix溶液中，50℃水浴15 min。6. 转化DH5α等感受态细胞。

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