293细胞转染试剂

 QuickShuttle 系列转染试剂说明书产品描述QuickShuttle 系列转染试剂是一类具有、配方的阳离子型转染试剂，具有高效、低毒和易于使用等优点，推荐用于常规哺乳动物细胞系的瞬时转染和稳定细胞系构建。QuickShuttle 区别于常规转染试剂的两个最主要特点是：（1）可以在贴壁细胞传代后尚未贴壁时立即进行转染（立传立转）；（2）转染操作可在一分钟内完成。重要提示1. 与常规转染试剂不同，使用QuickShuttle 可在贴壁细胞传代后尚未贴壁时直接进行转染（立传立转），从而可节省18~24 小时的转染前细胞培养时间。2. QuickShuttle 极大简化了转染操作，转染试剂和质粒混合后无需室温静置孵育，可直接加入含血清的细胞培养基中进行转染，而且无需在转染后补加血清或更换培养基，整个转染操作可在一分钟内完成。3. 立传立转、一分钟完成转染操作和高转染效率等优点使得部分使用QuickShuttle 的转染实验可在细胞传代后24 小时内完成，从而比常规转染试剂节约24~48 小时。4. 以24 孔细胞板转染实验为例，推荐一次（即每孔）转染的低内毒素质粒DNA 用量为1~2μg、转染试剂用量为3~5μl（请在正式实验前根据不同细胞和不同培养基用报告基因进行优化），质粒和转染试剂可用无菌生理盐水稀释。5. QuickShuttle 经过DMEM、RPMI-1640 和M199 等常规培养基测试，虽然在实验中推荐使用DMEM，但有实验结果表明M199 能够显著增强QuickShuttle 对Vero 细胞和293FT细胞的转染效果，因此可尝试使用不同培养基对转染条件进行优化。6. QuickShuttle 设计用于常规哺乳动物细胞系的瞬时转染和稳定细胞系构建，不推荐但可尝试用于哺乳动物原代细胞和二倍体细胞的转染。7. QuickShuttle 转染试剂建议常温运输，2~8ºC 保存（在-30 ºC 到室温范围内均可长时间稳定保存），无菌取用，有效期18 个月。
QuickShuttle-293 转染试剂（293 细胞）货号：KX0110044含量：0.8 ml用途：用于各种293 细胞的瞬时转染和稳定细胞系构建（立传立转）。注意事项：1. 质粒DNA：请用能够去除内毒素的方法制备高质量的质粒DNA。2. 稀释液：0.85%（W/V）生理盐水，用低内毒素纯水配制，高压消毒或除菌过滤。3. 培养基：经过DMEM、RPMI-1640 和M199 等常规培养基测试，推荐使用含5~10%牛血清的DMEM，若转染效果不理想可尝试其它培养基。4. 以24 孔细胞板转染实验为例，推荐每孔低内毒素质粒DNA 用量为2μg、转染试剂用量为3~5μl，请在正式实验前根据不同细胞和不同培养基用报告基因进行优化。5. 立传立转要求使用生长旺盛的细胞，即细胞生长至80-90%成片或刚长满。若使用生长过老的细胞，将明显影响立传立转的效率。6. 立传立转对细胞状态要求较高，如果转染效果不理想，可按QuickShuttle-Basic 的转染方法（见本说明书第3 页），在细胞贴壁后进行标准转染操作。使用方法1. 将新鲜消化的293 细胞接种到24 孔细胞板中，每孔1~2×105 细胞，1ml 完全培养基。备注：可在生长旺盛的细胞传代后直接按下述步骤2~5 进行转染实验，无需18~24 小时的等候时间。2. 将2μg 质粒DNA 和3~5μl 转染试剂分别稀释到50μl 生理盐水中。备注：质粒DNA 和转染试剂的量需要根据不同培养基来优化，但理论上不超出1~2μg 和3~5μl 范围。3. 合并上述两溶液并混匀。备注：无需其它转染试剂所需的10~30 分钟的等候时间。4. 将上述复合物直接加入到细胞培养基中，用加样器吸打混匀。备注：转染复合物可直接加入含血清的细胞培养基中进行转染。5. 将细胞板移至37ºC/5% CO2 孵箱中进行培养。备注：无需在转染后4~6 小时补加血清或更换培养基。6. 24~72 小时后根据实验需要进行瞬时表达分析或稳定细胞系加压筛选。

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