3.1引言富含GABA的食品被证明具有多种生理功能,其中富含GABA的米胚芽的生理功能包括:、肾功能活性化、肝功能活性化、预防、促进乙醇代谢及消臭等作用。研究表明富含GABA米胚芽还有精神安定作用和抑制大肠癌等其它生理功能。另外GABA还具有促进生长激素分泌的作用,口服5克GABA可使血液中的生长激素(hGH)显著提高,超过5ng/ml。hGH是人体内含量的几种激素之一,由于影响全身细胞、骨骼、肌肉和器官的生长,因此对于人体新陈代谢和各种生理功能有着广泛的调节作用,本章研究了富含GABA的米胚芽在功能方面的作用。3.2材料与设备 Glu直接转化富集GABA的米胚芽粉:第二章中所制备而得。3.3功能实验方法本实验动物选用无锡市原子技术研究所繁育场提供的二级健康昆明种雄性小鼠。3.3.1 分组方法以及剂量的选择将小鼠随机分为三组,每组10只,组间体重t检验无差别。剂量选择按照GABA在促进人生长激素分泌的推荐量(30-80mg/kgbw)的10倍为参照,即300mg/kgbw左右设定三个剂量组,按GABA的含量来确定米胚芽粉的添加量。组为对照组,喂以普通饲料;第二组为剂量Ⅰ组,在普通饲料中添加1.5g/kg的米胚芽粉,相当于GABA的剂量为100mg/kgbw第三组为剂量Ⅱ组,,在普通饲料中添加4.5g/kg的米胚芽粉,相当于GABA的剂量为300mg/kgbw第四组为剂量Ⅲ组,,在普通饲料中添加7.5g/kg的米胚芽粉,相当于GABA的剂量为500mg/kgbw。各组连续给予受试物4周后,测定各指标。3.3.2小鼠附重游泳实验运动耐力的提高是能力加强有力的宏观表现,游泳时间的长短可以反应动物运动疲劳的程度。末次给予受试物30min后,给小鼠尾部附体重5%的铅丝。将小鼠放置于25℃的水中,记录小鼠自游泳开始至头部全部没入水中,8s不能浮出水面的时间,作为游泳时间。3.3.3小鼠爬杆实验爬杆时间的长短可以反应动物静用力时疲劳的程度。直径0.8-1cm、长约25cm的玻璃圆棒,上端固定于木板上,下端悬空,距地面约20cm。将爬杆架置于水温15℃、深约10cm的水盆中。末次给予受试物30min后开始实验,将小鼠放在玻璃棒上,使肌肉处于静力紧张状态,记录小鼠由于肌肉疲劳从玻璃棒上跌落下来的时间,第三次落水时终止实验,累计三次的时间作为爬杆时间。3.3.4血清尿素氮的测定末次给予受试物30min后,将小鼠置于25℃的水中游泳30min,摘除眼球取血,使用试剂盒法测定尿素氮的含量。3.3.5血乳酸的测定末次给予受试物30min后,将小鼠放置于25℃的水中游泳30min,摘除眼球取血,使用对羟基联苯法测定血乳酸的含量。3.3.6肝糖原的测定 末次给予受试物30min后,将小鼠放置于25℃的水中游泳30min,处死后迅速的取出肝脏,以生理盐水冲洗干净,用滤纸吸干后准确称量0.25g肝脏置于有1.5ml30%KOH的试管中,沸水浴煮沸20min,使肝脏组织全部溶解。流水中冷却,将管中全部转移到50ml的容量瓶中,混匀,按照蒽酮比色法测定糖含量。3.3.8 统计方法实验结果以x±s表示,组间进行F检验。3.4试验结果3.4.1各剂量组对小鼠体重的影响表3-1各剂量组对小鼠体重的影响
组 别 | 动物数 | 实验前体重(g) | 实验后体重(g) |
空白组 | 10 | 263.7±11.8 | 381.5±31.3 |
剂量Ⅰ组 | 10 | 256.8±12.7 | 375.4±34.3 |
剂量Ⅱ组 | 10 | 257.3±10.3 | 378.1±27.2 |
剂量Ⅲ组 | 10 | 2609.7±9.2 | 378.3±28.1 |
由表3-1可见,饲料中添加富含GABA的米胚芽粉对小鼠正常生长和体重增加没有影响。3.4.2各剂量组对小鼠游泳实验的影响 表3-2 各剂量组对小鼠游泳时间的影响
组 别 | N(只) | 游泳时间(min) |
对照组 | 10 | 5.341±4.101 |
剂量Ⅰ组 | 10 | 10.982±7.811* |
剂量Ⅱ组 | 10 | 12.571±8.901** |
剂量Ⅲ组 | 10 | 12.978±4.313** |
注:*是与对照组比较,P<0.05,**是与对照组比较,P<0.01由表3-2可见,与对照组相比,三个剂量组对小鼠游泳时间都有延长作用,其中剂量Ⅰ组延长了103.8%(P<0.05),剂量Ⅱ组延长了131.5%(P<0.01),剂量Ⅲ组延长了139.0%(P<0.01)。3.4.3各剂量组对小鼠爬杆实验的影响表3-3 各剂量组对小鼠爬杆时间的影响
组 别 | N(只) | 爬杆时间(min) |
对照组 | 10 | 396.121±20.327 |
剂量Ⅰ组 | 10 | 609.857±18.891 |
剂量Ⅱ组 | 10 | 863.459±21.345* |
剂量Ⅲ组 | 10 | 864.603±17.911** |
注:*是与组比较,P<0.05,**是与组比较,P<0.01由表3-2可见,与对照组相比,三个剂量组对小鼠爬杆时间都有延长作用,其中剂量Ⅰ组延长了54.0%,剂量Ⅱ组延长了118.0%(P<0.05),剂量Ⅲ组延长了118.3%(P<0.01)。3.4.4 各个剂量组对小鼠生化指标的影响表3-4各剂量组对小鼠血清尿素、血乳酸以及肝糖原的影响
组 别 | N(只) | 血清尿素氮含量(mmol/L) | 血乳酸含量(mg/ml) | 肝糖原含量(g/100g) |
对照组 | 10 | 11.959±2.132 | 2.11±0.51 | 4.324±0.446 |
剂量Ⅰ组 | 10 | 11.754±2.448 | 1.83±0.35 | 12.348±1.796 |
剂量Ⅱ组 | 10 | 11.056±0.467 | 1.78±0.36* | 18.396±3.746* |
剂量Ⅲ组 | 10 | 10.427±0.426* | 1.67±0.52* | 19.064±3.55** |
注:*是与对照组比较,P<0.05,**是与对照组比较,P<0.01由表3-4可见,三个剂量组在对小鼠血清尿素氮、血乳酸以及肝糖原的影响上没有游泳和爬杆实验显著。剂量Ⅲ组对小鼠血清尿素氮和血乳酸的降低是显著的(P<0.05);剂量Ⅱ组对小鼠血乳酸的降低是显著的(P<0.05);三个剂量组小鼠肝糖原比对照组都有增加,剂量Ⅱ组和剂量Ⅲ组的增加都具有显著性(P<0.05和P<0.01)。根据中国卫生部关于保健性食品的评价指标,对于性试验项目有:附重游泳试验、爬杆试验、血乳酸、血清尿素试验和肝糖原试验,若1项以上(含1项)运动试验和2项以上(含2项)生化指标为阳性,即可判断该受试物具有的作用。在上面的试验中,剂量Ⅲ组在小鼠附重游泳时间、爬杆时间、血清尿素含量、血乳酸含量和肝糖原含量均于对照组具有显著性,剂量Ⅱ组在小鼠附重游泳时间、爬杆时间、血乳酸含量和肝糖原含量于对照组具有显著性,可以判定剂量Ⅱ组和剂量Ⅲ组受试物具有的作用。因此富含GABA的米胚芽具有的作用,可以作为功能食品的配料。但是对于富含GABA的米胚芽作用的机理还有待于进一步探讨,从游泳和爬杆实验来看,富含GABA的米胚芽的作用是十分显著的,但是生化指标却未能与之十分吻合,说明富含GABA的米胚芽的作用机理可能在于对小鼠运动能力的提高,如肌肉增强等,这方面还有待于深入研究。
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