黄曲霉毒素M1检测试剂盒说明书
1．概述
本产品是一敏感的用于定量检测黄曲霉毒素M1的免疫学检测方法。适用于牛奶和一些乳制品中黄曲霉毒素M1的检测。如果有必要可以利用HPLC, GC/MS方法加以证实。
2.安全性说明
试剂盒含有少量的黄曲霉毒素M1；底物中含有四甲基联苯胺；终止液中含有稀硫酸，避免皮肤和粘膜接触终止液；以上各溶剂不小心滴到皮肤上请用水冲洗。
3.存储和稳定性
存储：4–8℃
在使用前试剂盒的温度要恢复到室温(20-25℃)。
试剂在有效期内都可以使用。
4．原理
此试剂盒是通过AFM1抗体来检测AFM1的。将标准品或样品加入到微孔中和包被在微孔底部的抗AFM1的高亲和力抗体发生反应。如果样品中存在AFM1，它将和包被的抗体结合，此过程孵育30分钟，洗板。然后加入HRP（辣根过氧化物酶）标记的毒素，酶标记毒素与标准品或者样品与抗体没有结合的部位相结合。孵育60分钟，倒出孔里的液体，清洗后加入显色底物作用20分钟，在酶的作用下孔里将会出现蓝色。显色颜色的深浅与结合的酶结合物的量成正比例的关系，与标准品或样品中AFM1的量成反比例关系。所以，标准品或样品中的AFM1浓度越高，显色的蓝色将会越浅。加入酸，终止反应，底物颜色由蓝色变为棕黄色。微孔板放进酶标仪里，在OD450nm读取吸光度值。样品的吸光度值与试剂盒中标准OD值相比较，相对应得出结果。
5.缺陷
在样品中出现的很多和无机物在检测中是不发生反应的，然而样品中那些易变性的物质产生的基质效应是不可以完全避免的。奶中的脂肪对测定就有影响，因此奶在检测时要脱脂。在操作中发生错误也能引起误差，比如试剂盒的存储，错误的加液顺序，试剂加入的量不准确，在免疫反应或底物反应中太长或太短的孵育时间，太高或太低的孵育温度。
6．黄曲霉毒素M1测定的重要性
黄曲霉毒素(Aflatoxin, AF）是由多种霉菌代谢的毒性产物，例如Asperillus flavus和Asperillus parasiticus霉菌。他们具有致癌性，存在于谷物、坚果、棉籽和其它人类食物或动物饲料中。谷物可能被黄曲霉毒素的衍生物：B1、B2、G1和G2其中一种污染或者被多种毒素污染。AFB1是目前检测到的最毒的毒素。其他类型毒素如果污染的浓度很高也存在很大的危险。黄曲霉毒素能够引发人类很多病症包括肝癌、黄曲霉中毒、莱耶综合症和慢性肝炎。动物很容易摄取到黄曲霉毒素，因为动物吃的饲料在生长、收割和贮存过程中能被黄曲霉毒素产生的真菌毒素污染。当奶牛吃了被污染的饲料，AFB1在体内羟基化转化成AFM1，AFM1常在牛乳中被检测到。如果牛初乳中存在AFM1，针对一般的牛奶处理方法例如巴氏杀菌，但AFM1是非常稳定的，它可能一直留存到人类最终消费产品中。世界上大多数国家的政府已经对人类和动物性食品中制定了严格的黄曲霉毒素限量标准。很多国家已经声明降低牛奶和奶制品中的AFM1限量标准。欧盟已经将牛奶和奶制品中AFM1的限量定为：原奶：0.05ppb；婴儿奶：0.025 ppb；婴儿食品：0.025 ppb
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