赭曲霉毒素A总量试剂盒是利用竞争酶联免疫定量检测谷物,咖啡或动物饲料中含有的其他物质中所含的赭曲霉毒素A总量。试验方法的原理赭曲霉毒素A总量试剂盒的工作原理是酶联免疫吸附分析法。一种赭曲霉毒素的特异性抗体包被在聚苯乙烯酶标板的小孔中,用70%的甲醇将样品中的赭曲霉毒素萃取后,将含有赭曲霉毒素的萃取液或标准品和过氧化物酶标记赭曲霉毒素加入到小孔中,此时过氧化物酶标记赭曲霉毒素和样品、标准品中游离的赭曲霉毒素竞争性地与包被在板上的抗体结合。在室温下温育清洗后,加入底物溶液,室温孵育一段时间,发生蓝色反应。加入停止液,终止颜色反应,蓝色变成黄色。用酶标仪在450nm处测定光密度值(OD),样品中赭曲霉毒素A总量的浓度与OD值成反比关系。 试剂盒中所包含的试剂:1.酶标板1块:包括12条,每条含有8个小孔,每个孔中均包被有鼠抗赭曲霉毒素的单克隆抗体.2.稀释板1块:没有包被的12条8孔板。3. 6瓶赭曲霉毒素A标准品浓度分别为:0, 0.2, 0.5, 1.0, 2.0, 4.0 ng/ml(ppb),每瓶1.5 ml.4.酶标记物(过氧化物酶标记的赭曲霉毒素A):25 ml。5.底物溶液(TMB):15 ml。6.停止溶液(0.5 M H2SO4):15 ml。 需要的其它试剂和设备(试剂盒没有提供):粉碎机:能将样品磨至速溶咖啡颗粒大小。萃取容器:至少125ml。天平:20克以上的称量范围。100ml量筒。每个样品70ml试剂级甲醇。30ml去离子水或蒸馏水。滤纸:Whatman 1 型或同类型滤纸。过滤漏斗。l。ml和200m移液器和吸头:100计时器。洗瓶。吸水纸。酶标仪(450nm)。 注意事项:为了保证测定结果的可靠性,请按照下列良好实验室操作规范(GLP)进行实验1.在进行分析操作之前,请将所有的试剂回温到室温(19-27°C)。2.使用前,试剂储存在2 - 8°C,不要冰冻。3.未用完的试剂不要倒回原瓶中,按照实验所需的量取用试剂。4.实验过程中注意保证温度和反应时间。5.所有的试剂在使用前,通过翻转摇动进行充分的混合,但不要引起泡沐的产生。6.一旦实验开始,所有的操作步骤应该在规定的时间内完成,不要中断或者超时。7.所有的试剂瓶操作完成后立即盖好盖,不要将不同试剂瓶的盖混用。8.每个样品只能用自己的吸头,不能混用,防止交叉污染。9.所有的样品和标准物必须同时使用,所有的试验条件保持一致。10.不要将不同批次的试剂混用。11.不要使用过期的试剂。12.要经常的检查酶标仪和微量移液器的精度和准确度。
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