磺胺类多残留ELISA检测试剂盒
一、概要
磺胺类（SAs）药物在畜牧生产中应用十分广泛，主要在动物疾病防治方面有显著的疗效，但与此同时，这类药物显著的毒副作用也引起了人们的广泛关注。例如：影响泌尿系统功能，引起结晶尿，血尿，等反应及致癌性作。因此国内外对动物性食品中总磺胺以及单个磺胺的的限量做了规定。HPLC或GC-MS一直用作检测的方法，但是其前处理步骤费用昂贵；而使用酶联免疫检测试剂盒方法则可以经济、快速地检测。
本公司生产的磺胺类ELISA试剂盒具有准确、快速、简便的操作优势。
二、试验原理
本试剂盒采用间接竞争法。酶标板上包被的抗原与加入的标准品（或样本）中的抗原竞争结合加入的酶标抗体。多余的酶被洗去后，加入的底物在酶催化下反应，试剂呈蓝色，加入终止液后呈黄色，在450nm下有吸光值，其吸光值大小与标品（或样本）中的磺胺多残留药物浓度呈反比，通过标准品浓度的对数--吸光值百分比做曲线读取样本浓度。
三、适用范围
可定性、定量检测肉类、水产、蜂蜜、尿液等样本中磺胺多残留药物的残留量。
四、交叉反应率
磺胺甲噻二唑……………………………………………100 %
磺胺嘧啶…………………………………………………110 %
磺胺噻唑 ………………………………………………＞300%
酞酰磺噻唑（PST） ……………………………………89.8%
磺胺甲恶唑……………………………………………＞150%
磺胺异恶唑……………………………………………＞150%
磺胺吡啶 ……………………………………………… 55%
磺胺苯吡啶………………………………………………62%
磺胺间甲氧嘧啶 ………………………………………95%
磺胺对甲氧嘧啶……………………………………… 85%
磺胺间二甲氧嘧啶…………………………………… 67%
磺胺氯哒嗪 ……………………………………………75%
其它个别磺胺类药物也存在交叉……………………＜50%
五、检测步骤
测定前应须知：
1、使用之前将所有试剂和需用板条的温度回升至室温（20～25℃）。
2、使用之后立即将所有试剂放回2～8℃。
3、在ELISA分析中的再现性，很大程度上取决于洗板的一致性，正确的洗板操作是ELISA测定程序中的要点。
4、在所有恒温孵育过程中，避免光线照射，用盖板膜封住微孔板。
操作步骤：
1、将所需试剂从冷藏环境中取出，置于室温（20～25℃）平衡30min以上，注意每种液体试剂使用前均须摇匀。
2、取出需要数量的微孔板，将不用的微孔放入自封袋，保存于2～8℃。
3、洗涤工作液在使用前也需回温。
4、编号：将样本和标准品对应微孔按序编号，每个样本和标准品做2孔平行，并记录标准孔和样本孔所在的位置。
5 加标准品/样本：加标准品/样本20ml/孔到对应的微孔中，然后加入磺胺多残留的抗试剂80ml/孔，轻轻振荡混匀，用盖板膜盖板后置25℃避光环境中反应30min。
6、洗板：小心揭开盖板膜，将孔内液体甩干，用洗涤工作液250ml/孔，充分洗涤4~5次，每次间隔10s，用吸水纸拍干（拍干后未被清除的气泡可用未使用过的枪头戳破）。
7、加酶标物：加入磺胺多残留的酶标物100ml/孔，轻轻振荡混匀，用盖板膜盖板后置25℃避光环境中反应30min，取出重复洗板步骤6。
8、显色：加入底物液A液50ml/孔，再加底物液B液50ml/孔，轻轻振荡混匀，用盖板膜盖板后置25℃避光环境中反应15～20min。
9、测定：加入终止液50ml/孔，轻轻振荡混匀，设定酶标仪于450nm处（建议用双波长450/630nm检测，请在5min内读完数据），测定每孔OD值。(若无酶标仪，则不加终止液用目测法可进行判定)。
六、注意事项
1、室温低于20℃或试剂及样本没有回到室温（20～25℃）会导致所有标准的OD值偏低。
2、在洗板过程中如果出现板孔干燥的情况，则会出现标准曲线不成线性，重复性不好的现象。所以洗板拍干后应立即进行下一步操作。
3、每加一种试剂前需将其摇匀。
4、反应终止液为1M硫酸，避免接触皮肤。
5、不要使用过了有效日期的试剂盒；也不要使用过了有效期的试剂盒中的任何试剂，掺杂使用过了有效期的试剂盒会引起灵敏度的降低；不要交换使用不同批号试剂盒中的试剂。
6、储存条件
保存试剂盒于2～8℃，不要冷冻，将不用的酶标板微孔板放进自封袋重新密封。标准物质和无色的发色剂对光敏感，因此要避免直接暴露在光线下。
7、试剂变质的迹象
发色试剂有任何颜色表明发色剂变质，应当弃之。0标准的吸光度（450/630nm）值小于0.5（A450nm<0.5）时，表示试剂可能变质。
8、在加入底物液A液和底物液B液后，一般显色时间为10～15min即可。若颜色较浅，可延长反应时间到20min（或更长），但不得超过30min。反之，则减短反应时间。
9、该试剂盒反应温度为25℃，温度过高或过低将导致检测吸光度值和灵敏度发生变化。
七、贮藏条件及保存期
贮藏条件：保存试剂盒于2~8℃。
保存期：该产品有效期为12个月。
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