黄曲霉毒素B1酶联免疫试剂盒
黄曲霉毒素是由曲霉菌属的黄曲霉和寄生曲霉等产生的次级代谢产物，主要污染玉米、花生、坚果等。天然污染的黄曲霉毒素以AFB1为主，AFB1具有极强的急性毒性和致癌性，肝脏是其主要的靶器官。本试剂盒是以应用单克隆抗体为基础的ELISA检测方法，适用于定量检测饲料和谷物中的黄曲霉素B1。
试验原理：
本试剂盒采用直接竞争ELISA方法，在微孔板包被有黄曲霉素偶联抗原，加入黄曲霉素B1标准品或样品，游离黄曲霉素B1与微孔条上预包被的黄曲霉素B1偶联抗原互相竞争抗黄曲霉素B1抗体酶标记物，用TMB底物显色，加入终止液后颜色由蓝色变为黄色，用酶标仪在450nm波长下进行检测，吸光值与样品中黄曲霉素B1含量成反比。
适用范围：本试剂盒适用于定量检测饲料和谷物中的黄曲霉素B1。
交叉反应：
| 物质 | 交叉反应 |
| 黄曲霉素B1 | |
| 黄曲霉素B2 | 15% |
| 黄曲霉素G1 | 32% |
| 黄曲霉素G2 | 3% |
灵 敏 度：0.1ng/ml
检测下限：饲料、谷物检测下限1ppb
回 收 率：用本说明书提供的样本提取方法回收率大于90％。
精 密 度：试剂盒吸光度板内误差小于6％，板间误差小于10％。
注：其他信息请参考黄曲霉毒素B1酶联免疫试剂盒说明书
常见问题及解答
•问题一、加入反应终止液后，没有吸光值或吸光值偏低
| 可能原因 | 解决办法 |
| 未加入酶结合物 | 按照操作步骤重复实验 |
| 试剂盒未能充分回温 | 将试剂盒放在室温下（20-25℃） 回温后再进行操作（最少一个小时） |
| 试剂盒已过有效期 | 请使用在有效期内 |
| 实验室室温太低（低于20 ℃ ） | 请提高反应温度至（20-25℃） ，若无法提高，请适当延长步温育反应时间 ，可将30min延长至40min） |
| 未使用试剂盒中酶结合物、洗涤液等 | 请使用试剂盒中提供的物品进行实验，不同批号的试剂盒不能混用 |
| 终止试验后太久未判读 | 请在加入终止液后5min内判读 |
| 使用过的试剂盒未保存好 | 实验后未用完的试剂要放回2-8 ℃保存，未用完的酶标板要放到试剂盒提供的自封袋中与干燥剂一起密封保存在2-8 ℃ |
| 洗液配制错误 | 请使用试剂盒提供的洗液 |
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•问题二、标准曲线线性不佳，与试剂盒中质检报告的曲线不一致，或者重复性差
| 可能原因 | 解决方法 |
| 温育位置未避光或收到气流干扰 | 温育时不要直接暴露在强光下（日光等没有关系），也不要受到气流的干扰（如可在不通风的实验室） |
| 操作时间拖太久 | 实验操作熟练后再进行实验，一旦开始实验就不要在中途离开 |
| 板孔间相互污染 | 加样时，要小心切勿溅出孔外，造成其他板孔的污染 |
| 加样量不准 | 移液器请校准，保持加样的准确性 |
| 加样时的操作放大不正确 |
|
| 洗涤过程不正确 | 洗涤时确保每个微孔加样量一致；每次洗涤时间不要太长（导致过度洗板），也不要太短（洗板不彻底），一般10s左右；洗涤步骤完成后立即进行下一步骤 |
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•问题三、背景值或吸光度（OD）过高
| 可能原因 | 解决方法 |
| 室温太高（大于25 ℃ ） | 保持实验室温度20-25℃，避免在热源或阳光直射处实验 |
| 底物溶液受到污染 | 若发现底物溶液已经变色，不要再使用 |
| 反应时间太长 | 请严格控制实验反应时间 |
| 酶结合物污染了试剂盒中其他试剂 | 使用过的吸头立即丢弃，每次吸取不同的试剂要更换新的吸头，凡是试剂（特别是酶结合物和底物）接触过的容器立即清洗干净 |
| 使用了质量差的水 | 尝试用蒸馏水配制溶液 |
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•问题四、一个或多个标准品数据点超出曲线范围
| 可能原因 | 解决方法 |
| 洗涤过程不正确 | 洗涤时确保每个微孔加样量一致；每次洗涤时间不要太长（导致过度洗板），也不要太短（洗板不彻底），一般10s左右；洗涤步骤完成后立即进行下一步骤 |
| 微孔中的试剂未充分混匀 | 试剂加完后，在振荡器上振荡混匀（没有振荡器可轻敲板四周或在桌面上做圆周运动使其充分混匀） |
| 阴性标准品受到污染 | 严格按照试剂盒的操作说明进行实验 |
| 加入标准品和试剂的时间不一致 | 确保就绪，由低浓度到高浓度快速添加标准品并保证不被打扰 |
| 标准品添加顺序混乱或放置错误位置 | 按照说明要求重复试验并保证由低到高的顺序依次添加 |
| 标准品被污染或与其他标准品混淆 | 改用新标准品 |
| 标准品加样量不准 | 确保加样的准确性 |
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•问题五、板内及板间差异大
| 可能原因 | 解决方法 |
| 加入标准品和试剂、样品的时间不一致 | 尽可能排枪，中间不要间断 |
| 排枪使用不当 | 校准排枪检测吸嘴是否套紧，确保吸液量一致 |
| 洗涤系统出现故障 | 检测洗涤系统 |
| 不同批次的试剂混用 | 确保每个试剂盒不混用 |
| 板与板之间孵育时间差距过大 | 独立计时，确保一致的孵育时间 |
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