黄曲霉毒素总量(Aflatoxin Total)ELISA检测试剂盒
产品名称：黄曲霉毒素总量ELISA检测试剂盒
产品概述：黄曲霉毒素是一类真菌（如黄曲霉和寄生曲霉）的有毒的代谢产物，它们具有很强的致癌性，主要存在于谷物，坚果，棉籽以及一些和人类血液，动物饲料相关的产品中。农作物被收获后有可能被下列的一种或几种黄曲霉毒素污染：B1、B2、G1、G2。1993年黄曲霉毒素被世界卫生组织(WHO)的研究机构划定为I类致癌物，是一种毒性极强的剧毒物质。它被证明对人和动物的肝脏、肾脏等组织和器官具有很大的危害。产生黄曲霉毒素的霉菌（如黄曲霉、寄生曲霉等）遍及世界各地，黄曲霉毒素的污染可以发生在植物的生长、收获和加工、贮藏、运输等过程中。及时发现污染源是的预防黄曲霉毒素污染的方法。
黄曲霉毒素总量ELISA检测试剂盒本产品是利用免疫直接竞争法检测原理建立的一种定量检测试剂盒。具有简单、快速，无需特殊仪器设备等优势，既可以在实验室进行，也可在农场、饲料混合车间等进行实地测定。本试剂盒结果准确，灵敏度度为0.1ppb，准确率大于95% 。适用于粮食、食品、饲料原料、配合饲料等样本中的黄曲霉毒素总量的检测。
适用范围：可定性、定量检测谷物、花生、食用油、饲料、啤酒、红酒、酱油、面粉等样本中的黄曲霉毒素总量。
试验原理：黄曲霉毒素总量ELISA检测试剂盒采用竞争ELISA，在微孔板上预包被黄曲霉毒素抗原，加入样本（或黄曲霉毒素标准品溶液）及辣根过氧化物酶标记的黄曲霉毒素总量抗体。样本或标准品溶液中的黄曲霉毒素与预包被在板孔上的黄曲霉毒素抗原竞争结合辣根过氧化物酶标记的黄曲霉毒素抗体，与样本或标准品溶液中的黄曲霉毒素结合的酶标抗体在洗涤时被除去，再加入显色液，读取吸光值。样本的吸光值与其所含残留物黄曲霉毒素抗原的含量成负相关。对照标准曲线，即可得出相应残留物黄曲霉毒素的含量。
试剂配制：
（1）将黄曲霉毒素总量ELISA检测试剂盒取出放置于室温中，使试剂盒回温至室温 (20-25℃)。
（2）10倍稀释洗涤液准备：40mL浓缩洗涤液 (10×)，用蒸馏水或去离子水稀释至 400mL。在2-8℃可保存三个月。用前混匀。
（3）10倍稀释浓缩样品稀释液准备：20mL浓缩样品稀释液 (10×)，用蒸馏水或去离子水稀释至 200mL。在2-8℃ 可保存三个月。用前混匀。
操作步骤：
（一）谷物（样品稀释10倍）
1、脂肪含量少的谷物样品（如大米、玉米、小米等）称取1g（精细粉碎），加入4ml 50%甲醇/水溶液；
2、充分振荡3min；
3、5000g离心，10min；
4、取400ul上清液，加600ul样品稀释液，充分混匀；
5、取50ul溶液用于检测。
（二）花生（样品稀释10倍）
1、称取1g样品（精细粉碎），加入2ml石油醚，再加入4ml 50%甲醇/水溶液；
2、充分振荡3min；
3、5000g离心，10min；
4、取400ul下层清液，加600ul样品稀释液充分混匀
5、取50ul溶液用于检测。
（三）食用油（样品稀释10倍）
1、称取1g样品，加入4ml石油醚，充分振荡；
2、再加4ml 50%甲醇/水溶液，轻摇3min，静置分层；
3、取400ul下层清液，加600ul样品稀释液充分混匀；
4、取50ul溶液用于检测。
（四）饲料（样品稀释5倍）
1、称取1g饲料样品（精细粉碎），加入4ml 50%甲醇/水溶液；
2、充分振荡3min；
3、5000g离心，10min；
4、取上层清液2ml并加入2ml三氯甲烷，轻摇3 min，静置分层；
5、取1ml下层液（三氯甲烷层），60℃氮气吹干；
6、加入500ul 50%甲醇/水（1:1）溶液溶解，并加入750ul样品稀释液，充分混匀；
7、取50ul溶液用于检测。
（五）面粉（样品稀释10倍）
1、称取1g面粉样品，加入4ml 50%甲醇/水溶液；
2、充分振荡3min；
3、5000g离心，10min；
4、取上层清液500ul并加入1ml三氯甲烷，轻摇3 min，静置分层；
5、取500ul下层液（三氯甲烷层），60℃氮气吹干；
6、加入250ul 50%甲醇/水溶液溶解，并加入375ul样品稀释液，充分混匀；
7、取50ul溶液用于检测。
（六）葡萄酒（样品稀释5倍）
1、取1ml葡萄酒样品，加入4ml三氯甲烷；
2、轻摇3 min，静置分层；
3、取1ml下层液（三氯甲烷层），60℃氮气吹干；
4、加入500ul 50%甲醇/水溶液溶解，再加入750ul样品稀释液，充分混匀；
5、取50ul溶液用于检测。
（七）啤酒（样品稀释10倍）
1、取1ml啤酒样品（去除CO2），加入2.5ml甲醇，再加入1.5ml蒸馏水；
2、振荡3min；
3、取出500ul振荡后的溶液再加入750 ul样品稀释液，充分混匀；
4、取50ul溶液用于检测。
（八）酱油、醋（样品稀释5倍）
1、称取1g样品，加入1ml蒸馏水和4ml三氯甲烷；
2、轻摇3min，静置（若未分层，5000g离心10min）；
3、去1ml下层液（三氯甲烷层），60℃氮气吹干；
4、加入500ul 50%甲醇/水溶液溶解，并加入750ul样品稀释液，充分混匀；
5、取50ul溶液用于检测。
注意事项：
1、室温低于20℃或试剂及样本没有回到室温（20～25℃）会导致所有标准的OD值偏低。
2、在洗板过程中如果出现板孔干燥的情况，则会出现标准曲线不成线性，重复性不好的现象。所以洗板拍干后应立即进行下一步操作。
3、每加一种试剂前需将其摇匀。
4、反应终止液为2M盐酸，避免接触皮肤。
5、不要使用过了有效日期的试剂盒；也不要使用过了有效期的试剂盒中的任何试剂，掺杂使用过了有效期的试剂盒会引起灵敏度的降低；不要交换使用不同批号试剂盒中的试剂。
6、储存条件
保存黄曲霉毒素总量ELISA检测试剂盒于2～8℃，不要冷冻，将不用的酶标板微孔板放进自封袋重新密封。标准物质和无色的显色剂对光敏感，因此要避免直接暴露在光线下。
7、试剂变质的迹象
显色试剂有任何颜色表明显色剂变质，应当弃之。0标准的吸光度（OD450nm）值小于0.5（A450nm<0.5）时，表示试剂可能变质。
8、该黄曲霉毒素总量ELISA检测试剂盒反应温度为25℃，温度过高或过低将导致检测吸光度值和灵敏度发生变化。
试剂盒组成：
1、96孔酶标板×1块
2、标准液×6瓶：（1ml/瓶）
0ppb, 0.1ppb, 0.3ppb, 0.9ppb, 2.7ppb, 8.1ppb
3、酶标物 1瓶 …………………………………… 6ml
4、底物液1瓶 ………………………………… 12ml
5、终止液1瓶 ……………………………………6ml
6、浓缩洗涤液（10×）1瓶………………………40ml
7、浓缩样品稀释液（10×）1瓶…………………20ml
8、操作说明书一份
注意：标准品含有低浓度黄曲霉毒素、终止液含2M HCl，需小心取用。勿在有效期外使用本试剂盒。
贮藏条件及保存期：
贮藏条件：保存试剂盒于2～8℃。
保存期：该产品有效期为12个月。
PriboFast®酶联免疫检测试剂盒系列：• 采取直接竞争ELISA方法，检测时间段
• 精确度与与HPLC方法接近，定量范围宽。
• 重复性好 ，不同实验室之间检测结果稳定性好
•高灵敏度和高回收率
•符合霉菌毒素相关标准和中国有关限量要求；
•稳定性高，达到12个月；
•操作简单：简单培训即可独立操作。
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