黄曲霉毒素B1 （Aflatoxins B1）ELISA检测试剂盒
产品名称：黄曲霉B1试剂盒
产品概述：黄曲霉毒素是曲霉菌属的黄曲霉和寄生曲霉的二次代谢产物。这些霉菌来源于潮湿的热带地区，大面积种植的粮食作物会被其污染。黄曲霉毒素是自然界危险的致癌物质。
黄曲霉毒素中毒性强的是黄曲霉毒素B1，其几乎一直和黄曲霉毒素B2、G1 和 G2共存。他们主要存在于玉米、花生、巴西坚果、棉籽和开心果中。美国食品和药品监督管理局（FDA）已对食品和饲料中的黄曲霉毒素允许水平作了规定，因此，准确测定黄曲霉毒素含量对于食品和饲料的品质监控具有重要意义。
适用范围：
黄曲霉B1试剂盒可定性、定量检测玉米、大米、麦类、豆类、花生、饲料、食用油等样本中的黄曲霉毒素B1。
检测限：0.1ppb
试验原理
采用竞争ELISA，在微孔板上预包被黄曲霉毒素B1抗原，加入样本（或黄曲霉毒素B1标准品溶液）及辣根过氧化物酶标记的黄曲霉毒素B1抗体。样本或标准品溶液中的黄曲霉毒素B1与预包被在板孔上的黄曲霉毒素B1抗原竞争结合辣根过氧化物酶标记的黄曲霉毒素B1抗体。与样本或标准品溶液中的黄曲霉毒素B1结合的酶标抗体在洗涤时被除去。再加入TMB显色液，读取吸光值。样本的吸光值与其所含残留物黄曲霉毒素B1抗原的含量成负相关。对照标准曲线，即可得出相应残留物黄曲霉毒素B1的含量。
试剂配制：
1、样品稀释液：用去离子水将浓缩样品稀释液按1:9体积比进行稀释（1份浓缩样品稀释液+9份去离子水）。
2、洗涤工作液：用去离子水将浓缩洗涤液按1:9体积比进行稀释。
3、50％甲醇/水：取无水甲醇，用去离子水以1：1倍稀释（1份无水甲醇＋1份水）
操作步骤：
1. 将所需试剂从冷藏环境中取出，置于室温（20～25℃）平衡30min以上，注意每种液体试剂使用前均须摇匀。
2. 取出需要数量的微孔板，将不用的微孔板放进原锡箔袋中并且与提供的干燥剂一起重新密封，保存于2～8℃。不要冷冻。
3. 洗涤工作液在使用前也需回温。
4. 将样本和标准品对应微孔按序编号，每个样本和标准品做2孔平行，并记录标准孔和样本孔所在的位置。
5. 加标准品/样本50ml到对应的微孔中，加入酶标物50ml/孔，轻轻振荡混匀，用盖板膜盖板后置室温避光环境中反应15min。
6. 小心揭开盖板膜，将孔内液体甩干，用洗涤工作液300ml/孔，充分洗涤5次，每次间隔30s，用吸水纸拍干。
7. 加入显色液100ml/孔，轻轻振荡混匀，用盖板膜盖板后置室温避光环境反应15min。
8. 加入终止液50ml/孔，轻轻振荡混匀，设定酶标仪于450nm处测定每孔OD值。
注意事项：
1. 室温低于20℃或试剂及样本没有回到室温（20～25℃）会导致所有标准的OD值偏低。
2. 在洗板过程中如果出现板孔干燥的情况，则会出现标准曲线不成线性，重复性不好的现象。所以洗板拍干后应立即进行下一步操作。
3. 每加一种试剂前需将其摇匀。
4. 反应终止液为2M盐酸，避免接触皮肤。
5. 不要使用过了有效日期的试剂盒；也不要使用过了有效期的试剂盒中的任何试剂，掺杂使用过了有效期的试剂盒会引起灵敏度的降低；不要交换使用不同批号试剂盒中的试剂。
6. 储存条件：
保存试剂盒于2～8℃，不要冷冻，将不用的酶标板微孔板放进自封袋重新密封。标准物质和无色的发色剂对光敏感，因此要避免直接暴露在光线下。
7. 试剂变质的迹象：
发色试剂有任何颜色表明发色剂变质，应当弃之。0标准的吸光度（450/630nm）值小于0.5（A450nm<0.5）时，表示试剂可能变质。
8. 在加入底物液A液和底物液B液后，一般显色时间为20～30min即可。若颜色较浅，可延长反应时间到35min（或更长），但不得超过40min。反之，则减短反应时间。
9. 该试剂盒反应温度为25℃，温度过高或过低将导致检测吸光度值和灵敏度发生变化。
试剂盒组成:
1. 96孔酶标板…………………………………… 1块
2. 标准液（1ml/瓶） …………………………… 6瓶
0ppb, 0.1ppb, 0.3ppb, 0.9ppb, 2.7ppb, 8.1ppb
3. 酶标物 1瓶 ……………………………………… 6ml
4. 底物液1瓶 …………………………………… 12ml
5. 终止液1瓶 …………………………………… 6ml
6. 浓缩洗涤液 （10×） …………………………… 40ml
7. 样品稀释液（10×） ……………………………… 20ml
8. 操作说明书一份
注意：标准品含有低浓度黄曲霉毒素、终止液含2M HCl，需小心取用。勿在有效期外使用本试剂盒。
贮藏条件及保存期:
贮藏条件：保存试剂盒于2～8℃。
保存期：黄曲霉B1试剂盒有效期为12个月。
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