1 、原理
在一定条件下，磷和氨基甲酸酯类农药对胆碱酯酶正常功能有抑制作用，其抑制率与农药的浓度呈正相关。正常情况下，酶催化神经传导代谢产物 ( 乙酰胆碱 ) 水解，其水解产物与显色剂反应，产生黄色物质，用分光光度计测定 412nm 下的吸光度随时间的变化值，计算出抑制率，通过抑制率可以判断出样品中是否含有磷或氨基甲酸酯类农药的存在。
2 、试剂配制及保存
特别提示：本试剂盒可适用于不同厂家的各种型号农残检测仪及分光分度计，仪器操作根据其配套说明书方法，农残检测方法根据本试剂盒提供方法操作。
缓冲液： 取 1 包缓冲剂加入 500mL 纯净水中，搅拌溶解制成磷酸缓冲液 (pH 8.0) , 常温保存。
显色剂： 取 1 瓶显色剂加 25mL 磷酸缓冲液溶解，使用时取 100 μ L 避光、 4 ℃保存。
底 物： 取 1 瓶底物加 12.5mL 蒸馏水溶解，使用时取 100 μ L ， 4 ℃冰箱保存；
或 取 1 瓶底物加 2.5mL 蒸馏水溶解 ，使用时取 20 μ L ， 4 ℃冰箱保存；
胆碱酯酶 ： 酶制剂无需配制，可直接取用， 4 ℃保存。
3 、样品提取
取 2g 果蔬样品（块茎类取 4g ）剪成 1cm 左右见方碎片，放入小烧杯（或取样瓶）中；加入 10mL 缓冲液，振荡 1min～2min ，倒出提取液，静置 2min 待测；
4 、测试
对照测试： 于反应瓶中加入 2.5mL 缓冲液， 再分别加入 100 μ L 显色剂和酶液，混匀，静置预反应 10min 后加入 100 μ L（或20μL）底物，摇匀并立即倒入比色杯中，放入测试通道， 按仪器“对照”键测试 1min的吸光度变值 ΔΑ 0 .
样品测试： 于反应瓶中加入 2.5 mL 待测液， 其他操作与对照测试相同，测试 1 min的吸光度变化值 ΔΑ t .
结果判定： 以分光光度计测试 (412 nm 波长 ) 时，按以下公式计算出抑制率 : 抑制率 (%)=[( ΔΑ 0 －ΔΑ t )/ ΔΑ 0 ]×100 ；以农残检测仪检测时其抑制率一般可自动计算。若样品抑制率≥50%，表示被测果蔬农残超标，为阳性结果。阳性结果的样品需做 2 次以上重复检测，多次检测仍呈阳性需用气相色谱等仪器做进一步确认。
小提示 1 ： 本试剂盒可在常温条件下进行检测，并可以满足 GB/T 5009.199-2003 方法的要求。采用国标方法时，预反应时间为 15 min ，条件为 3 7℃水浴或恒温培养箱；测试反应时间为3 min. 其余与上述方法相同。
小提示 2 ： 检测时对照与样品可同时检测，而无需将两者分开两次检测，每批检测的时间应控制一致，否则不具有可比性。
小提示 3 ： 底物的使用量根据配制时的体积决定，若稀释成 12.5mL/瓶，则使用时加入100μL；若稀释成2.5mL/瓶，则使用时加入20μL；国标方法中底物的使用量100μL.
小提示 4 ： 在加底物的环节中，可预先将底物加入比色杯，待静置时间一到，马上将反应瓶中的反应液倒入已经加有底物的比色杯，并迅速放入测试通道进行测试。这样可以减少同时检测多个样品时因加底物时间过长而造成的误差。
5 、注意事项：
保存：试剂盒包含缓冲剂 10 包，胆碱酯酶 10 瓶，显色剂 2 瓶，底物 4 瓶，可供 500 份样品测试；使用前整盒试剂应保存 4 ℃冰箱，保质期 12 个月；室温或常温保存时，保质期 3~6 个月。
使用：任何试剂使用时，用一瓶打开一瓶，用完后才使用新的，防止变质。
器具原则：任何用于移液的器具和容器都应各自贴上标签，单独使用，以免交叉污染。
试剂只出不入原则：测试时，从任何试剂瓶吸出的试剂，禁止再次注射回试剂瓶。
6 、农残速测试剂盒的特点
（ 1 ）良好的稳定性：在 4 ℃条件下可以保存至少一年，常温条件下保质期可长达 3 个月；
（ 2 ）专业化的制备技术：酶试剂调配成直接取用的液体状态，为用户减少稀释酶液的麻烦及不确定因素；
（ 3 ）打破传统方法所需的苛刻条件的限制：酶试剂可在常温下直接使用（而无需 37 ℃条件），使操作更加简便快捷，并大大降低检测设备的成本；
（ 4 ）检测结果灵敏：检测限可达 0.1mg/kg 以下，对甲胺磷及乐斯本等常见农药的检测限均低于 0.8mg/kg ，优于相关国家国准要求；
（ 5 ）抗干扰性强：对芹菜、辣椒、韭菜等辛辣样品同样可检测，不易受其植物次生物质的干扰；
（ 6 ）通用性：可以适用于同功能的型号的检测仪器；
（ 7 ）样品处理及检测过程总时间不超过 15 min ，大量检测时每均每个样品检测时间低于 5 min, 大大加快了检测速度，节省检测时间。
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