以引起罗非鱼链球菌病的无乳链球菌为对象，利用4种常用消毒剂和5种抗生素药品作对比试验，探究防治链球菌病的最适外泼消毒剂和内服药。
罗非鱼作为世界水产行业最主要的养殖品种之一，具有生长速度快、食性杂、肉质好、营养价值高、繁殖能力强等优点广泛分布于热带亚热带的淡咸水域中。我国沿海地区特别是海南、广东、福建、广西等省份养殖的罗非鱼产量占世界一半以上。
近年来，伴随着罗非鱼养殖面积和养殖密度越来越高，由无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)感染引起的罗非鱼链球菌病已经成为阻碍我国罗非鱼养殖业健康持续发展的主要因素。特别是自2009年以来罗非鱼“链球菌病”呈现全国暴发的趋势，在每年的高温季节尤其是7-9月份，发病率在50%以上，死亡率最高可达80%以上。
目前罗非鱼“链球菌病”缺乏安全高效的防控措施，虽然使用一定量的抗生素能在某些程度上抑制该病的暴发，但是随着无乳链球菌耐药性的增加，该病存在比较严重的停药反弹的现象。每年由于罗非鱼出口药物残留超标造成罗非鱼出口受阻、国内滞销、鱼价低迷给我国整个罗非鱼产业带来了巨大的经济损失。寻找安全高效的的罗非鱼“链球菌病”防控方法是目前众多水产养殖者急需解决的问题。
一、样品的采集与诊断
2015年10月，在福建省云霄县常山下坂某养殖场暴发罗非鱼“链球菌病”，规格在20cm左右，表现为典型的“链球菌病”症状。患病鱼体表发黑在池边漫游打转，摄食减少，眼球突出浑浊，体表、鳃盖和下颌等处充血出血，尾鳍镶白边，肝脏、胆囊、脾脏充血肿胀严重时糜烂，肠道和腹腔中充满淡黄色积水，烂鳃并且溃烂部位附着污泥，鳃盖内侧淤血，显微观察发现鳃丝表面有少许车轮虫和指环虫，鳃丝存在坏死灶，鳃小片毛细血管扩张出现充血现象，在鳃丝动脉中发现气泡。
二、病原分离纯化与鉴定
使用70%的酒精棉球对患病鱼体表进行擦拭消毒后进行解剖，用火焰灼烧过的接种环挑取少许肝脏组织于BHI固体培养基上进行划线，37℃培养18h。根据培养结果挑取优势菌落重新进行划线，同样条件培养后在BHI培养基中进行划线纯化。将纯化后的病原菌在BHI液体培养基中37℃，200r/min培养18h后将菌液送往生物公司进行测序后经过比对得知为无乳链球菌。
三、药敏实验
使用4种常用消毒剂和5种抗生素药品作为对比实验，选取福尔马林（有效成分：37%-40%甲醛）、卫捷（有效成分：戊二醛、苯扎溴铵）、绿安（有效成分：月苄三甲氯铵）、金碘（有效成分：聚维酮碘）4种常见消毒药和磺胺嘧啶钠（有效成分：磺胺嘧啶钠）、呋喃西林（有效成分：呋喃西林）、强力泰（有效成分：恩诺沙星）、呼乐芬（有效成分：氟苯尼考）、鱼血安（有效成分：盐酸环丙沙星、盐酸小檗碱）5种抗生素，使用牛津杯法进行药敏实验。
吸取100μL培养后的病原菌液均匀涂布于使用BHI固体培养上，然后吸取双蒸水稀释后的不同消毒药（1%）100μL打入牛津杯中，共做3个平行。
将5种抗生素各称取0.2g溶于50ml双蒸水中，配制成4g/L浓度的溶液。吸取100μL培养后的病原菌液均匀涂布于BHI固体培养基上，吸取100μL相应的抗生素溶液于牛津杯中，连续做3个平行，37℃培养18h后观察抑菌效果。
本实验分离出的罗非鱼链球菌病原菌在4种消毒剂（编号1-4）的对比中，对福尔马林最为敏感，抑菌圈直径在37mm左右，其次是卫捷和绿安，抑菌圈直径在24mm左右，通过3组实验表明金碘对病原菌并不敏感，抑菌效果不明显。
在5种抗生素（编号5-9）的对比实验中发现，病原菌对鱼血安最为敏感，抑菌圈直径为34mm左右，强力泰、呼乐芬次之，抑菌圈直径30mm左右， 最后是呋喃西林，抑菌圈直径27mm左右，某些养殖户常用的磺胺嘧啶钠对无乳链球菌没有抑菌效果。
四、防治意见
罗非鱼“链球菌病”给养殖产业带来了巨大危害，一直都是困扰养殖户的重大难题，目前仍未找到有效的方法来控制和治疗该疾病。本文通过药敏实验筛选了一种水体消毒剂和一种合适的内服药来对罗非鱼链球菌病进行防治，以减少养殖户的经济损失。通过对4种常见消毒剂福尔马林、卫捷、绿安、金碘的药敏结果发现福尔马林的抑菌效果最强，卫捷和绿安的效果基本一致，金碘抑菌效果不明显。福尔马林虽然抑菌效果最强但是对人体及罗非鱼具有一定毒副作用，安全性方面相对于卫捷或绿安略有差距。因此综合考虑对于外泼消毒剂以卫捷或绿安最为合适。
通过对5种抗生素药敏实验结果对比发现病原菌对鱼血安最敏感，强力泰、呼乐芬次之，呋喃西林抑菌效果远不如前三者，且该抗生素属于人工合成的一类硝基呋喃类的广谱抗菌药物，近些年来发现呋喃类的药物对人体具有潜在的致突变和致癌性，因此不推荐使用。磺胺嘧啶钠作为一种磺胺类药物是早些年罗非鱼“链球菌病”防治的特效药，随着“链球菌病”的大量暴发某些养殖户频繁使用该类药品，造成链球菌对磺胺类药物产生极强的耐药性。
本文通过药敏实验得知，磺胺嘧啶钠对无乳链球菌没有产生任何抑菌效果。这与该地区的某些养殖户在罗非鱼“链球菌病”暴发的时候投入大量磺胺类药物没有产生应有治疗的效果相符合。其他3种抗生素鱼血安、强力泰和呼乐芬，由于安全性高，可以作为防治罗非鱼链球菌的内服药，根据抑菌效果建议优先选择鱼血安。
通过实地观察该罗非鱼养殖场水质过浓溶氧过高导致罗非鱼患“气泡病”，潜在增加罗非鱼的死亡率，因此建议泼洒二氧化氯进行消毒，以抑制藻类过度繁殖造成水体中溶氧过高。在鳃丝上发现少许的车轮虫及指环虫由于数量不多可以使用阿维菌素等刺激性小的杀虫药进行全池泼洒以抑制车轮虫及指环虫的生长，起到预防作用。
作者：福建大北农水产科技有限公司 秦波 郭超蓝
