某些细菌在其发育的一定阶段可以形成一个内生孢子,即为芽孢.芽孢形成后并不脱离原细菌菌体,它的形状、大小和在菌体的位置都是一定的.老熟的芽孢可自菌体中脱落出来.芽孢结构上的特点是壁厚和细胞质浓厚,所以不易着色,通常多采用着色力强的染色剂和用加热等手段促使芽孢着色,并利用复染的方法对比原细菌菌体和芽孢,才易于在显微镜下看到它们.但是,若用简单染色法使菌体着色而芽孢无色也可以衬托出芽孢的形状、大小和位置.【实验目的】
掌握细菌芽孢染色的方法.
【实验原理】
细菌的芽孢含水量少,脂肪含量高,芽孢壁较厚,对染料的透性差,不易着色,但是一旦着色又难以脱色.
通常,芽孢染色采用弱碱性染料孔雀绿在加热的条件下进行.染色完毕,用蒸馏水冲洗.因孔雀绿是弱碱性染料,与菌体结合力较差,因此易被水冲洗掉,而进入芽孢的孔雀绿却难于溶出.水洗后,再用一种呈红色的碱性染料复染,使菌体和芽孢呈现不同颜色.
【实验材料、药品及器具】
1、菌种 枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)
2、染液 孔雀绿染液
藏花红染液
3、器皿 显微镜、酒精灯、镊子、洗净的载玻片4 片、香柏油、二甲苯、擦镜纸、吸水纸、玻璃红、洗瓶装蒸馏水、接种环.
【实验步骤】
1、取培养24h左右的枯草芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌分别涂片、干燥、固定.
2、在涂片部分用吸水纸条盖住,然后向纸条滴加孔雀绿液至饱和.
3、将涂片逐渐加热至微冒蒸汽并不时添加染液以防止吸水纸条干燥.染色
2-8 分钟.
4、除去吸水纸条,用蒸馏水轻轻冲洗掉多余染液.
5、用藏花红染液复染30~60S.
6、水洗,风干或烘干后镜检.
【实验结果】
1、首先用低倍镜,再用油浸镜检查制片,注意芽孢的颜色和菌体的颜色.
2、绘制芽孢图.注意芽孢在菌体内的位置、大小和形状并绘制游离芽孢形态图.
【思考题】
1、为什么经孔雀绿染色后,水洗再复染红色染液只能染上菌体?
2、用革兰氏染色能否看到芽孢,为什么?
