许多细菌自细胞内长出一至许多根细丝状附属物称为鞭毛.鞭毛是细菌的运动器官,有鞭毛的细菌均可运动.鞭毛细长透明,其宽度在普通光学显微镜波长检验范围之外,所以不易观察.但是在不染色情况下可以检测到细菌的运动推断鞭毛的存在.【实验目的】
学习并掌握鞭毛染色的原理和方法.
【实验原理】
细菌的鞭毛非常纤细,直径一般在20nm左右,用电镜才能观察.本实验采用特殊染色法,即在染色前先经媒染剂处理,媒染剂吸附在鞭毛上,使鞭毛加粗,便可达到普通光学显微镜的辨析范围以内.染色后,即可利用普通光学显微镜进行观察.
【实验材料、药品及器具】
1、菌种 培养18-24h的菌种
大肠杆菌(Escherichia coli)
普通变形杆菌(Proteus Vulgaris)
荧光极毛杆菌(Pseudomonas fluorescens)
2、染色液 鞭毛染色液甲
鞭毛染色液乙(实验前配好的新鲜染液)
3、器皿 显微镜、酒精灯、洗瓶装蒸馏水、香柏油、二甲苯、擦镜纸、吸水纸、干净载玻片、玻璃缸、无菌水三管、灭菌长滴管三支.
【实验步骤】
1、用长滴管取无菌水轻轻移入长好菌种的试管内,培育20-30min使细菌自己慢慢游入水中并充分舒展其鞭毛,使水呈轻度混浊.
2、取一滴菌悬液滴于玻片的1/3位置上,然后轻轻抬起此端,使悬液缓慢流至玻片另一端,平放使其在空气中自然干燥固定.切忌用火焰烘干.
3、在涂片部位滴甲液,染色3~5min.
4、用蒸馏水轻轻冲洗.
5、加乙液染30~60s,可在酒精灯上稍稍加热.冲洗多余的染液.
6、制片干后检查.
【实验结果】
1、显微镜下检查鞭毛染成什么颜色和形状.
2、比较菌种鞭毛着生的位置、数目并绘图.
【思考题】
1、菌种的培养时间与鞭毛染色有什么关系?
2、你在显微镜下看到的鞭毛是否为原来的大小和形状?
3、鞭毛涂片与芽孢涂片有何区别?为什么?
