生活饮用水中微生物的检测方法

采样原则：所采集的样品具有代表性。

采样容器:不能是新的污染源:不吸收或吸附某些待测组分不与待测组分发生反应。保证从采样到分析期间样品各组分的浓度不发生改变。

微生物样品必须按一般无菌操作的基本要求采集,并保证在运送、贮存过程中不受污染。

所需培养基和试剂：营养琼脂、9ml无菌生理盐水管。

操作步骤：

1.以无菌操作方法用灭菌吸管吸取1mL充分混匀的水样,注入灭菌平皿中。

2.倾注约15mL已融化井冷却到45℃左右的营养琼脂培养基,并立即旋摇平皿,使水与培养基充分混匀（每次检验时应做一平行接种,同时另用一个平只倾注营养琼脂养基作为空白对照）

3.待冷却凝固后,翻转平皿,使底面向上,置于36℃±1℃培养箱内培养48h±2h,进行菌落计数,即为水样1mL中的菌落总数。

4.培养完成后，用眼睛直接观察,必要时用放大镜检查,以防遗漏。

实验数据处理:

若菌落数在100以内时按实有数报告,大于100时,采用两位有效数字,在两位有效数字后面的数值,以四舍五入方法计算,为了缩短数字后面零的个数也可用10的指数来表示(见表1)。

国家标准(GB5749-2022)规定生活饮用水菌落总数每毫升不得超过100个。

操作步骤：

1.以无操作方法吸取1mL充分混匀的水,注入盛有9mL灭菌生理盐水的试管中,混匀成1:10稀释液。

2.吸取1:10的稀释液1ml，注入盛有9mL灭菌生理盐水的试管中,混匀成1:100稀师液,按同法依次稀释成1:1000,1:1000释液等备用（如此递增稀释一次,必须更换一支1m灭菌管）。

3.然后用无菌极管取稀释的水样和2个~3个适释度的水样1mL,分别注入灭菌平皿内。之后操作同自来水水样的检验步骤。

试验数据处理:

计算平均菌落数，首先选择平均菌落在30~300之间者进行计算。

计算方法和报告方式：

一般水源水中菌落总数与水清洁程度的关系：

所需培养基和试剂：乳糖蛋白胨培养液、双料乳糖蛋白胨培养液、伊红美蓝培养基。

多管发酵法步骤:

初步发酵试验:采用乳糖蛋白培养液36℃±1℃培养18-24h观察产酸产气情况。

平板分离:

将产酸产气的发酵管分别转种在伊红美蓝琼脂平板上，于36 ℃士1℃培养箱内培养18 h~24 h,观察菌落形态,挑取符合下列特征的菌落进行革兰氏染色镜检:

--深紫黑色.具有金属光泽的菌落﹔

--紫黑色、不带或略带金属光泽的菌落﹔

--淡紫红色、中心较深的菌落。

复发酵证实试验:

经上述染色镜检为革兰氏阴性无芽孢杆菌,同时接种乳糖蛋白豚培养液,置36 ℃士1℃培养箱中培养24h士2h,有产酸产气者,即证实有总大肠菌群存在。

结果报告(MPN):根据 GB5750.12-2022 所附检索表报告结果。

所需培养基和试剂：乳糖蛋白胨培养液、EC肉汤、伊红美蓝培养基

多管发酵法步骤:

初步发酵试验:采用乳糖蛋白培养液36℃±1℃培养24h观察产酸产气情况。

耐热培养:阳性管接种在EC肉汤管中，44.5℃培养24h观察产酸产气情况。

平板培养:阳性管接种在EMB平板上，36℃±1℃培养24h。

结果报告(MPN):根据 GB5750.12-2023 所附检索表报告结果。

所需培养基和试剂：EC-MUG培养基

多管发酵法步骤:

耐热培养:将总大肠菌群初发酵中产酸或产气的管进行大肠埃希氏菌检测，接种此类试管中的液体到EC-MUG管中，在培养箱或恒温水浴中44.5℃培养24h。如使用恒温水浴，在接种后30min内进行培养，使水浴液面超过EC-MUG管的液面。

结果报告(MPN):

将培养后的EC-MUG管在暗处用366nm紫外灯照射，如有蓝色荧光，则表明水样中含有大肠埃希氏菌。

计算EC-MUG阳性管数，根据 GB5750.12-2023 所附检索表报告结果。