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标准菌株的活化方法

   2023-03-23 1029
核心提示: 实验室必须保存有满足试验需要的标准菌种/菌株,除检测方法(如药物敏感试验、抗菌性能测试)中规定的菌株外,还应包括应用……(世界食品网-www.shijieshipin.com)
 实验室必须保存有满足试验需要的标准菌种/菌株,除检测方法(如药物敏感试验、抗菌性能测试)中规定的菌株外,还应包括应用于培养基(试剂)验收/质量控制、方法确认/证实、阳性对照、阴性对照、人员培训考核和结果质量的保证等所需的菌株。并且标准菌种必须从认可的菌种或标本收集途径获得。              

▲CNAS-CL09-2013《检测和校准实验室能力认可准则在微生物检测领域的应用说明》

常用标准菌种来源

美国菌种保藏中心ATCC

英国国家典型菌株保藏中心NCTC

中国医学细菌保藏管理中心CMCC

中国工业微生物菌种保藏管理中心CICC

 

 

 ATCC和CICC标准菌种的常见包装形式

接下来一起了解下标准菌株的活化方法

 

ATCC标准菌种KWIK-STIKTM产品的活化说明

将KWIK-STIKTM产品平衡至室温,撕开袋子。取出菌种管,揭下标签上可撕取部分,贴于原始培养皿或QC记录本上。捏碎管帽处的安瓿,使其释放出液体,将管子直立以使液体流入管底。挤压管底的菌球,使之与液体混合,以形成均匀的菌悬液。将棉签浸于菌悬液中,并于培养皿约三分之一范围内轻轻挤压并旋转涂抹。使用无菌接种环进行三区或四区划线,以尽可能分离出单菌落。随即在适合的温度和条件下倒置培养已接种的原始培养皿。按照适宜的生物危害品处置方法(如121℃高压30 min),丢弃菌种管。

详情请参阅北京陆桥官方网站资料下载区标准菌种活化官方说明


 




 

 ATCC标准菌株KWIK-STIKTM产品操作说明

CICC标准菌种的操作说明

使用酒精棉球擦拭冻干菌种管表面进行消毒。将冻干管顶端置于酒精灯火焰上均匀加热约1~2分钟。立即滴2~3滴无菌水于加热部位,使管壁破裂。使用镊子或剪刀敲击裂痕处,将管顶端敲落。吸取约0.5mL液体培养基于冻干管中,将冻干菌粉充分溶解。取0.2mL菌悬液转移至装有5mL~8mL液体培养基的试管中混匀,并取0.1mL菌悬液转移至平板培养基上,进行划线分离。将液体培养基和平板培养基置于合适条件下培养。按照适宜的生物危害品处置方法(如121℃高压30 min),丢弃菌种管。

注:也可使用砂轮在冻干管顶端打磨出裂痕,再使用镊子或剪刀将管顶端敲落。

 CICC标准菌株的打管方式

菌株活化用培养基的选择

标准菌株的活化需使用非选择性(不含任何抑菌成分),且营养富集的培养基,固体培养基和液体培养基建议同时使用,固体培养基上更易观察到菌种的形态、纯度,液体培养基更利于菌种的复苏和增殖,在特定条件下培养以优化菌株的生长和回收,常见菌种活化培养基见表1和表2。

表1常见菌种活化推荐使用固体培养基

菌种类别

菌种举例

培养基和货号

普通细菌

金黄色葡萄球菌

胰蛋白胨大豆琼脂

GCM168

对营养要求较高的细菌

化脓链球菌

羊血琼脂平板PB001

嗜盐性弧菌

副溶血性弧菌

3%氯化钠胰蛋白胨大豆琼脂

CM409

霉菌和酵母菌

黑曲霉

酿酒酵母

沙氏葡萄糖琼脂CM145

乳酸菌

嗜热链球菌

婴儿双歧杆菌

MRS琼脂GCM188

维生素测定用菌株

鼠李糖乳杆菌

乳酸杆菌琼脂CM1401

梭菌属

产气荚膜梭菌

羊血琼脂平板PB001

弯曲菌

空肠弯曲菌

巧克力平板PB002A

哥伦比亚血琼脂平板

PB003A

表2常见菌种活化推荐使用液体培养基

菌种类别

菌种举例

培养基和货号

普通(对营养要求较高)细菌

金黄色葡萄球菌

化脓链球菌

脑心浸出液肉汤

GCM917B

嗜盐性弧菌

副溶血性弧菌

3%氯化钠脑心浸出液肉汤

GCM917B+3%NaCl

霉菌和酵母菌

黑曲霉

酿酒酵母

沙氏葡萄糖肉汤CM154

乳酸菌

嗜热链球菌

婴儿双歧杆菌

MRS肉汤CM187

维生素测定用菌株

鼠李糖乳杆菌

乳酸杆菌肉汤CM1402

梭菌属

产气荚膜梭菌

庖肉培养基

CM605+CM607

弯曲菌

空肠弯曲菌

Bolton肉汤CM182

+裂解脱纤维羊血+FBP浓原液

微生物培养温度

绝大多数微生物为嗜中温,推荐培养温度为36℃±1℃;

嗜冷菌(如小肠结肠炎耶尔森氏菌、荧光假单胞菌等)推荐培养温度25℃~30℃;

嗜热菌(如嗜热脂肪芽孢杆菌)推荐培养温度55℃~65℃。

微生物氧气条件

绝大多数微生物为兼性厌氧菌,正常环境培养;

厌氧菌(如双歧杆菌属、梭菌属)需在厌氧环境下培养;

微需氧菌(如弯曲杆菌属)需在微需氧环境下培养。

厌氧和微需氧培养需要配备培养罐、厌氧(或微需氧)产气袋和氧气指示剂。厌氧(或微需氧)产气袋为一次性产品,培养罐开启后需更换产气袋。陆桥代理进口品牌三菱瓦斯、OXOID和BD产品。



 

 日本三菱产气袋和培养罐

培养时间

将菌液接种到平板和肉汤中,在合适的温度和氧气条件下培养,一般细菌需要培养24h~48h,霉菌培养3d~5d。

生物安全

实验室的生物安全防护级别应与其拟从事的试验活动相适应。

沙门氏菌、单核细胞增生李斯特氏菌等第三类病原微生物,必须在二级生物安全柜中操作,确保生物安全!





 
标签: 标准
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