GB/T 5750.2-2006生活饮用水标准检验方法 水样的采集和保存
GB/T 5750.12-2006生活饮用水标准检验方法 微生物指标
本文主要包含
1.生活饮用水中的微生物指标
2.水样采集规则及注意事项
3.菌落总数、总大肠菌群、耐热大肠菌群、大肠埃希氏菌的测定方法
4.对所检测水样的综合分析
生活饮用水中的微生物指标
| 项目 | 单位 | 限值 | 说明 |
| 总大肠菌群 | MPN/100ML或 CFU/100ML | 不得检出 | 一般性污染 |
| 耐热大肠菌群 | MPN/100ML或 CFU/100ML | 不得检出 | 指示粪便污染 |
| 大肠埃希氏菌 | MPN/100ML或 CFU/100ML | 不得检出 | 指示粪便污染 |
| 菌落总数 | CFU/100ML | 100 | 一般性污染 |
菌落总数
水样在营养琼脂上有氧环境下，37℃培养48h后，所得1mL水样所含菌落的总数。
检测意义:作为一般性污染的指标,即评价被检样品的微生物污染程度和安全性。水样菌落总数越多,说明水被微生物污染程度越严重,病原微生物存在的可能性越大,但不能说明污染的来源。
总大肠菌群
指一群在37℃培养24h能发酵乳糖，产酸产气，需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌。
检测意义:作为粪便污染的指标。水样总大肠菌群的含量,表明水被粪便污染的程度，而且间接地表明有肠道致病菌存在的可能。
耐热大肠菌群
指一群在44-44.5℃培养24h能发酵乳糖，产酸产气，需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌。我国习惯上称之为“粪大肠菌群”。
微生物指标常规检验流程图
一、水样采集
采样原则：所采集的样品具有代表性。
采样容器:不能是新的污染源:不吸收或吸附某些待测组分不与待测组分发生反应。保证从采样到分析期间样品各组分的浓度不发生改变。
微生物样品必须按一般无菌操作的基本要求采集,并保证在运送、贮存过程中不受污染。
自来水水样:先将自来水龙头用火焰烧灼3min灭菌再开放水龙头使水流5min(经常用水的水龙头放水1~3min)后,采集水样于无菌玻璃瓶,约占瓶容量80%,以便摇匀水样。
水源水水样:选有代表性的地点及可疑地方,一般距水面下10-15cm采集，采样后在水中改好盖子，再从水中取出。
注意事项
1.严格无菌操作。
2.做好标记:采得水样后应立即记录水样名称、地点、时间等内容。
3.从速送检。水样从采集到检验不应超过2h,在4℃下保存不应超过24h。
二、菌落总数测定
所需培养基和试剂：营养琼脂、9mL无菌生理盐水管。
自来水水样检测
操作步骤：
1.以无菌操作方法用灭菌吸管吸取1mL充分混匀的水样,注入灭菌平皿中。
2.倾注约15mL已融化井冷却到45℃左右的营养琼脂培养基,并立即旋摇平皿,使水与培养基充分混匀（每次检验时应做一平行接种,同时另用一个平只倾注营养琼脂养基作为空白对照）
3.待冷却凝固后,翻转平皿,使底面向上,置于36℃±1℃培养箱内培养48h,进行菌落计数,即为水样1mL中的菌落总数。
4.培养完成后，用眼睛直接观察,必要时用放大镜检查,以防遗漏。
结果分析与报告:
计算平均菌落数，若菌落总数(CFU/mL)当检样的菌落数为1~100时,按实有数报告；大于100时,采用二位有效数字报告。
国家标准(GB 5749-2006)规定生活饮用水菌落总数每毫升不得超过100个。
水源水检测
操作步骤：
1.以无操作方法吸取1mL充分混匀的水,注入盛有9mL灭菌生理盐水的试管中,混匀成1:10稀释液。
2.吸取1:10的稀释液1mL，注入盛有9mL灭菌生理盐水的试管中,混匀成1:100稀师液,按同法依次稀释成1:1000,1:1000释液等备用（如此递增稀释一次,必须更换一支1m灭菌管）。
3.然后用无菌极管取稀释的水样和2个~3个适释度的水样1mL,分别注入灭菌平皿内。之后操作同自来水水样的检验步骤。
结果分析与报告:
计算平均菌落数，首先选择平均菌落在30~300之间者进行计算。
一般水源水中菌落总数与水清洁程度的关系：
| 水的类别 | 最清洁水 | 清洁水 | 不太清洁水 | 不清洁水 | 极不清洁水 |
| 菌落总数CFU/100ML | 10-100 | 100 -1000 | 1000 -10000 | 10000 -100000 | > 100000 |
注意事项
1.菌落总数测定中,应选择合适的稀释度进行(生活饮用水,国家标准规定每毫升不得超过100个,因此以直接吸取1毫升到平板进行培养)
2.各稀释管、相应半皿做好标记。包括:水样名称、稀释度、时间、小组。
3.严格无菌操作进行水样稀释时,每一稀释度均需更换吸管。
4.倾注时,要注意营养琼脂的温度。
5.倾入琼脂后要混匀,待琼脂凝固后倒置培养。
三、总大肠菌群测定
所需培养基和试剂：乳糖蛋白胨培养液、双料乳糖蛋白胨培养液、伊红美蓝培养基。
多管发酵法步骤:
初步发酵试验:采用乳糖蛋白培养液36℃±1℃培养24h观察产酸产气情况。
平板分离:对阳性管培养物,接种于伊红美蓝培养基观察菌落特征,并进行革兰氏染色和镜检。
复发酵证实试验:对典型和可疑菌落,接种于乳糖蛋白胨培养液,进行复发酵证实试验。
结果报告(MPN):根据 GB 5750.12-2006 所附检索表报告结果。
四、耐热大肠菌群测定
所需培养基和试剂：乳糖蛋白胨培养液、EC肉汤、伊红美蓝培养基
多管发酵法步骤:
初步发酵试验:采用乳糖蛋白培养液36℃±1℃培养24h观察产酸产气情况。
耐热培养:阳性管接种在EC肉汤管中，44.5℃培养24h观察产酸产气情况。
平板培养:阳性管接种在EMB平板上，36℃±1℃培养24h。
结果报告(MPN):根据 GB 5750.12-2006 所附检索表报告结果。
五、大肠埃希氏菌测定
所需培养基和试剂：EC-MUG培养基
多管发酵法步骤:
耐热培养:将总大肠菌群初发酵中产酸或产气的管进行大肠埃希氏菌检测，接种此类试管中的液体到EC-MUG管中，在培养箱或恒温水浴中44.5℃培养24h。如使用恒温水浴，在接种后30min内进行培养，使水浴液面超过EC-MUG管的液面。
结果报告(MPN):
将培养后的EC-MUG管在暗处用366nm紫外灯照射，如有蓝色荧光，则表明水样中含有大肠埃希氏菌。
计算EC-MUG阳性管数，根据GB 5750.12-2006所附检索表报告结果。
