1. 取样前准备工作1.1 依据检测区域的取样点数，按照《培养基配制、灭菌标准操作程序》制备适量的营养琼脂培养基。 1.2 在超净工作台内，以无菌操作法将配制好的营养琼脂培养基以每皿约15mL的装量分装，待培养基凝固后移出洁净区。 1.3 将制备的营养琼脂平皿倒置于隔水式恒温水浴培养箱内于30～35℃培养48小时。取出逐个检查，确认无菌落数后即可使用。 1.4 采样：将上述制备好的营养琼脂平皿交与QA人员取样。
2. 仪器、设备和培养基
2.1 所用的仪器、设备和培养基 2.1.2 浮游菌采样器 2.1.3 培养皿（φ90mm×15mm） 2.1.4 培养基（营养琼脂培养基） 2.1.5 恒温培养箱
2.2 仪器、设备、培养基的要求 浮游菌采样器 2.2.1 浮游菌采样器必须要有流量计和定时器。 2.2.2 应严格按仪器说明书的要求进行操作。 2.2.3 采样器必须按仪器的检定周期，定期对仪器作检定，以保证测试数据的可靠性，检验项目有：定时器，转盘转速，流量计。 2.2.4 每次测试前应先接通电源，启动真空抽气泵，然后调节流量计和定时器。 2.2.5 空气采样量根据需要选定，已知采样器的流量（L/min）,设定采样时间（min）两者相乘即得采样量（L）。 2.2.6 采样口必须用便于消毒及化学性能稳定的材料制造，采样管严禁渗漏，内壁应光滑，采样管的长度应根据测定点的高度定，尽量减少弯曲。
3. 测试方法
3.1 测试用仪器、培养皿表面必须严格消毒。 3.1.1 采样器进入被测房间前先用消毒剂灭菌。 3.1.2 用消毒剂擦净培养皿的外表面。 3.1.3 采样前，先用消毒剂消毒采样器的顶盘、转盘以及罩子的内外面，采样结束再用消毒剂轻轻喷射罩子的内壁和转盘。 3.1.4 采样口及采样管使用前必须高温灭菌，如用消毒剂对采样管的外壁、内壁进行消毒，应将管中的残留液倒掉并晾干。 3.1.5 采样者应穿戴与被测洁净区域相应的工作服，在转盘上放入或调换培养皿前，双手用消毒剂消毒。
3.2 采样程序 3.2.1 仪器经消毒后先不放入培养皿，开动真空泵抽气，使仪器的残余消毒剂蒸发，时间不少于5min，并调好流量、转盘转速。 3.2.2 关闭真空泵，放入培养皿，盖上盖子后调节采样品缝隙高度。 3.2.3 置采样器于采样点后，开启采样器、转动定时器，根据采样量设定采样时间。
4. 测试规则
4.1 测试状态 4.1.1 浮游菌测试前微生物限度检查室已经消毒过。 4.1.2 测试状态为静态测试，并在报告中注明测试状态。
4.2 测试人员 4.2.1 测试人员必须穿戴符和被测环境级别的工作服。 4.2.2 静态测试时，室内人员不得多于2人。
4.3 测试时间 4.3.1 对单向流，测试应在净化空调系统正常运行不少于10min后开始。 4.3.2 对非单向流，测试应在净化空调系统正常运行不少于30min后开始。
4.4 最少采样点数目及其布置，最小采样量，见下表： 4.4.1 工作区测点位置离地0.8m～1.5m左右，送风口测点位置离开送风面30cm左右；可在关键设备或关键工作活动范围处增加测点。 4.4.2 每个采样点一般采样一次。 4.4.3 对于单向流或送风口，采样器采样管口朝向应正对气流方向；对于非单向流，采样管口向上。 4.4.4 布置采样点时，至少应离开尘粒较集中的回风口1m以上。 4.4.5 采样时，测试人员应站在采样口的下风侧。
5. 培养 取样结束后将平皿复倒置隔水式恒温水浴培养箱内于30～35℃培养48小时。并以未采样的营养琼脂平皿作对照皿。
6. 菌落计数
6.1 用肉眼直接计数，然后用5-10倍放大镜检查，是否遗漏。 6.2 若培养皿上有2个或2个以上菌落重叠，可分辨时，仍以2个或2个以上的菌落计数。计数：培养结束，将上述培养后的平皿取出，逐个点计菌落数，必要时用放大镜检查，并记录。
7. 结果计算
7.1 平均菌落数的计算见下式：
式中：m 为该房间（或区域）的平均菌落数； m1、m2‥‥‥mn 为该房间（或区域）各取样点的菌落数； N 为培养皿总数。
8. 结论
8.1 洁净室（区）内的平均菌落数必须低于所选定的评定标准。 8.2 若某洁净室（区）的平均菌落数超过评定标准，则必须对此区域先行消毒，然后重新测试两次，测试结果必须合格。
