绞碎牛肉(或牛心) 1000g
15%氢氧化钠溶液 27mL
胰蛋白酶 40mL
三氯甲烷 1mL
氯化钠 10g
蒸馏水 2000mL
制法
1 称取碎牛肉,加蒸馏水,隔水加热到80℃,维持15min。
2 加氢氧化钠溶液,对pH试纸呈弱碱性,冷至40℃。
3 加胰蛋白酶、氯仿,在36±1℃放置4~5h,每小时摇动一二次。
4 4h后,吸取上层液5mL于试管中,加5%硫酸铜溶液0.1mL、4%氢氧化钠溶液5mL,混合之。若呈红色,则不须再消化,可由温箱取出。
5 加入15%乙酸溶液45mL,对pH试纸呈酸性。
6 煮沸15min,使胰蛋白酶破坏,冷后,放冰箱内一夜。
7 次日吸取上层清液,加氯化钠10g,并加水补足原量,煮沸。
8 校正pH7.4~7.6(加15%氢氧化钠溶液约10mL),加热,用滤纸过滤,分装烧瓶,121℃高压灭菌20min。
注:①此培养基可作为琼脂培养基的基础,不需加蛋白胨。
②胰蛋白酶之配制:称取去脂绞碎的猪胰500g,加入乙醇500mL、蒸馏水1500mL,混合之,装人玻塞瓶内。每日摇匀三次。3d后,用绒布过滤挤出其汁,加盐酸至0.05%,放冰箱内保存备用。