具体操作见下图：
①将菌种管和待接种斜面试管握在左手中，试管底接触掌心。斜面一面向上，并处于接近水平位置。
②先菌种和待接种斜面试管的棉塞旋转一下，以便接种时易于拔出。右手以拿笔或拿毛笔的姿势捏住接种环金属柄，将要伸入试管部分的金属柄和金属丝在酒精灯火焰外焰上灼烧灭菌。
③用右手小指、无名指和手掌下沿将两管的棉塞同时夹住并拔出，棉塞不得接触任何物品，更不得放在桌面上。
④再将两个试管口在火焰上灼烧。将灼烧过的接种环伸入接种管内。使接种环在试管内壁上冷却，然后用接种环在菌苔上刮取少许后抽出，抽出时勿与试管壁相碰，也不要通过火焰。
⑤迅速将粘有菌种的接种环伸入待接种斜面试管内，自斜面底部向上往复“之”字划线，注意不要划破琼脂。
⑥划线完毕后将接种环抽出，灼烧管口，塞上棉塞。塞棉塞时勿用试管口去迎棉塞，以免试管离开火焰周围无菌环境时污染杂菌。检查试管塞是否塞紧后将其放于试管架上。火焰灼烧接种环。
这里提到的斜面穿刺是指固体高斜面穿刺，如下图。
固体高斜面穿刺示意图
是把目标菌苔通过接种针接种到固体培养基内部和斜面上的一种接种方法。沙门氏穿刺接种三糖铁斜面的操作就属这种情况。穿刺固体培养基是为了观察细菌在深层培养基中生长和代谢的情况。
操作时用笔直的接种针，从长有目标菌的培养基上挑取少量菌苔。将接种针平稳刺入培养基，勿触到管底（距离试管底部大约2mm~3mm），也不可碰到试管内壁，然后沿原穿刺途径慢慢抽出接种针，最后在斜面上进行“之”字划线。
这里需要特别注意的是：斜面划线和穿刺操作一定针对纯培养物，否则实验操作是无意义的。划线或穿刺的目的是为了将纯培养物二次传代培养。这种操作也见于标准菌株复壮或传代。整个操作过程中要严格规范操作，严格控制交叉污染。
针对细菌是否好氧，又可分为好氧菌固体培养基接种、厌氧菌固体培养基接种和微需氧菌固体培养接种。这可以用厌氧罐、厌氧盒或厌氧袋。搭配配套使用的厌氧剂和微需氧剂来实现合适的培养环境。对于要求特别严格或者菌体特别敏感的情况时，可以借助厌氧手套箱来进行操作（如下图）。
厌氧手套箱是20世纪50年代末问世的专门用于研究专性厌氧菌的重要装置，箱体结构非常严密，箱内既可以通过塑料手套进行实验操作，又可进行恒温培养。箱内一般充入85%的氮气、5%的二氧化碳和10%的氢气。同时将氧气用催化剂去除，使箱内始终维持严格的无氧状态。物品可以由有带有密闭装置的交换室进出箱体。
