培养基在使用之前必须进行灭菌处理，将其所含活菌全部杀死或全部除去。常用的灭菌方法有过滤除菌、干热灭菌、湿热灭菌及辐照灭菌等。其中，湿热灭菌法又包括四种方式:煮沸法、流动蒸汽灭菌法、间歇灭菌法和压力蒸汽灭菌法。通常来说，使用比较多的是压力蒸汽灭菌法。
但是对于有些培养基来说,高压条件会损坏培养基中的某些成分,不利于培养基的使用，所以只能采用煮沸灭菌的处理方法。本文主要就煮沸灭菌方法进行讨论。
有关煮沸灭菌的描述,通常有如下几种方式:
a、称取本品41. 5g,加热溶解于1000mL蒸馏水中,煮沸不要超过2分钟。无需高压灭菌。临用时制备，不得超过3小时。
b、称取本品50. 3g,加入1000mL蒸馏水中，加热煮沸至完全溶解，冷至45-50℃， 摇匀，倾入无菌平皿备用。无需高压灭菌。
c、称取本品89g,煮沸溶解于1000mL蒸馏水中，冷至45-50℃时，倾入无菌平皿，备用。注:无需高压灭菌。
d、称取本品57g,加热搅拌溶解于1000mL蒸馏水中，不要过分加热，冷至50-55℃时，倾入无菌平皿,部分开盖干燥2h,然后盖上，备用。无需高压灭菌。在24小时内使用。
这些方法描述中，都特别强调“无需高压灭菌”、“不要过分热”、“煮沸充分溶解”,那么究竟该怎样操作，才能达到既灭菌完全又尽量降低对培养基的破坏呢?
2、为了对培养基进行有效煮沸灭菌,根据我们实践摸索，建议如下操作:
①准备好电磁炉和搪瓷缸(不要用铁质容器) ;
②将培养基按比例加水，称量至搪瓷缸中，用玻璃棒不断搅拌，直至完全溶解、无明显团状物或颗粒;
③将搪瓷缸置于电磁炉上，大火烧开，期间持续搅拌,避免糊底;当液面完全沸腾后，立即将搪瓷缸从电磁炉上拿开,算是一次煮沸操作;液面回落后，立即放回电磁炉,重复上面的步骤;总共煮沸3次即可。
④将煮好的培养基冷却至需要的温度,进行倾注平皿等操作。
1、补水
加热煮沸的过程，培养基中的部分水分会蒸发掉，造成水分偏少，影响培养基的质量(如平板强度等)，导致菌落形态等结果的偏差，因此为了尽量减少误差,需要在煮沸之前，向搪瓷缸中补加适量培养基配制用水，经验估计,通常每煮一缸培养基需补加15- 20mL水，实际操作中，需根据各实验室的具体情况(容器大小及装量)进行摸索。
2、溶解
所有的培养基，在煮之前必须搅拌至完全溶解，不允许将尚有成团培养基的状态下，直接进行加热煮沸,那样很容易出现灭菌不彻底的现象，尤其是有些含琼脂的培养基,甚至会有部分琼脂不能彻底溶解，导致倒出的平皿上有明显的麸皮状琼脂小颗粒，或者有些含有染料的培养基也可能出现染料颗粒,都会影响培养基的使用。
3、搅拌
煮沸全程必须持续不断搅拌,以免糊底。
4、防烫
液面沸腾后，要及时将搪瓷缸从电磁炉上取下，以免液体沸出，造成培养基沾染或烫伤操作人员。
更多文章（点击关键词）
微生物检测电子书丨微生物检测视频汇总丨最受欢迎的微生物检测干货 I 肉制品丨乳制品丨电子秤使用 I 原始记录用什么笔 I 实验室绩效考核 I 生物安全 I微生物检测与控制技术
