试验方法：以接种针挑取待试菌可疑菌落或纯培养物，穿刺接种并涂布于斜面，置36±1℃培养18~24h，观察结果。
三糖铁琼脂(TSI)成分：
蛋白胨 20.0g
牛肉膏 3.0g
乳 糖 10.0g
蔗 糖 10.0g
葡萄糖 1.0g
硫酸亚铁铵(含6个结晶水) 0.5g
酚 红 0.025g或5g/L溶液5mL
氯化钠 5.0g
硫代硫酸钠 0.5g
琼 脂 12.0g
蒸馏水 1000.0mL
除酚红和琼脂外,将其他成分加入400mL蒸馏水中,搅拌均匀,静置约10min,加热煮沸至完全溶解,调至pH7.4±0.1。另将琼脂加入600mL蒸馏水中,搅拌均匀,静置约10min, 加热煮沸至完全溶解。
将上述两溶液混合均匀后,再加入酚红指示剂,混匀,分装试管(12mm×100mm),每管约2～4mL,高压灭菌121℃ 10 min或115℃15 min,灭菌后置成高层斜面,呈桔红色。
原理分析：本培养基适合于肠杆菌科的鉴定。用于观察细菌对糖的利用和硫化氢（变黑）的产生。该培养基含有乳糖、蔗糖和葡萄糖的比例为10:10:1，只能利用葡萄糖的细菌，葡萄糖被分解产酸可使斜面先变黄，但因量少，生成的少量酸，因接触空气而氧化，加之细菌利用培养基中含氮物质，生成碱性产物，故使斜面后来又变红，底部由于是在厌氧状态下，酸类不被氧化，所以仍保持黄色。
而发酵乳糖的细菌(e.coli)，则产生大量的酸，使整个培养基呈现黄色。
如培养基接种后产生黑色沉淀，是因为某些细菌能分解含硫氨基酸，生成硫化氢，硫化氢和培养基中的铁盐反应，生成黑色的硫化亚铁沉淀。
提问：志贺氏菌都能分解葡萄糖，产酸不产气，大多不发酵乳糖，不产生H2S。应该产生什么现象？
大肠杆菌，能分解葡萄糖产酸产气，大多数能分解乳糖，不产生H2S。应该是什么现象？
沙门氏菌，能分解葡萄糖，不发酵乳糖，大多数产生H2S，多数产气。
下面照片所示2-3-4，可能是大肠杆菌、沙门氏菌还是志贺氏菌？
答案：2－志贺氏菌 3－沙门氏菌 4－大肠杆菌
