培养基倾注温度
1、培养基的倾注时适宜温度约45℃。培养基置手心感觉不烫,但是置手背感觉烫时,培养基温度大约就是45℃。培养基倾注时温度太高的话,凝固时间较长,另外皿盖上会有大量冷凝水,不利于后续实验。温度太低则容易出现倒板过程中瓶中培养基部分凝固的现象。
2、有些培养基需要加入添加成分,这些添加成分在加入前应先放置到室温,避免冷的液体造成琼脂凝结或形成片状物。
3、目前多数实验室培养基灭菌后会放置水浴或者烘箱中,需使用的时候拿出来直接倒板。但培养基静置时间不宜过长,静置时间一般不超过4小时。静置时间过长,培养基中琼脂可能会少量凝固,形成类似絮状析出。
4、在实验过程中不可避免因特殊情况而导致未倒板培养基已凝固,凝固后培养基可重新加热溶解。一般来说沸水浴或者电磁炉加热,不能重新再灭一次菌。
培养皿中有冷凝水
一般来说,难以避免都会有几滴,影响不大。如果过多则需要注意。
1、当需要表面接种,需要吹干平板表面冷凝水,否则容易产生蔓延菌落。可放在有对流的无菌净化台中吹干培养基表面,但不能过度干燥,否则培养过程中平板容易开裂。
2、如果是进行倾注平板计数,则可在凝固后的琼脂表面再覆盖一薄层琼脂培养基即可。
倾注量
一般平板倾注量在18-20ml左右,如果培养时间超过48小时或者是培养温度高于40℃,为防止水分过量蒸发导致平板开类,倾注量一般是25ml左右。一些培养皿会有刻度,按照刻度倾注即可。
平板气泡
倒板过程中容易出现气泡,特别是像BS琼脂这类需要摇匀后倒板的培养基。气泡过多的话会影响结果观察,倒平板时尽量缓慢倒入,将气泡留在瓶子底部。平板中有少量气泡的话,可以把气泡摇到平板壁上,这样不会影响结果观察。