分光光度法测定中，除了需从试样的角度选择合适的显色反应和显色条件外，还需从可见分光光度计/紫外可见分光光度计等仪器的角度选择适宜的测定条件，以保证测定结果的准确度。
1.入射光波长的选择
在最大吸收波长处测定吸光度不仅能获得高的灵敏度，而且还能减少由非单色光引起的对朗伯-比尔定律的偏离。因此在分光光度法测定中一般选择最大吸收波长为入射波长。
2. 参比溶液的选择
在实验中，要选择合适的空白溶液作为参比溶液来调节仪器的零点，以便消除显色溶液中其他有色物质的干扰，抵消吸收池和试剂对入射光的影响。根据试样溶液的性质，选择合适组分的参比溶液很重要。
3. 吸光度范围选择与控制
任何分光光度计都有一定的测量误差，测量误差的来源主要是光源的发光强度不稳定法，光电效应的非线性，电位计的非线性，杂散光的影响，单色器的光不纯等因素，对于一台固定的分光光度计来说，以上因素都是固定的，也就是说它的误差具有一定稳定性。
4.比色皿的使用
选择适宜规格的比色皿，尽量把吸光度值调整在0.2~0.8之间。同一实验使用同一规格的同一套比色皿，以减少测量误差，所以用普通分光光度法不适用于高含量或极低含量物质的测定。
