一、微生物检测意识
树立正确的无菌观念和检测人员的素质，是每一个微生物检测人员应具备的素质，好的修养素质和积极的工作态度是保证结果准确的基础，下面的规定规范都是为检测服务的，如果检测人员没有好的素质，这些规定都是虚设，摆设；希望下面的规范是每位检测人员想要做得，而不是强加在自己身上的紧箍咒。
①增强自己得生物安全意识，如何保护自己，如何保护样品，如何无菌操作，有责任心。
②实验原理，实验原理是实验的精髓，掌握它，就能够对整个实验更好的了解深入，学习研究。
③实验条件的把握，对实验的每个条件是否掌握清楚，实验的关键控制点是否清楚。
④实验结果的把握，一个实验结果的出现，首先应该自我分析，并且具备这种分析能力，对异常如何处理或是进一步验证。
⑤具备研究好学心态，检测工作是一个相对只是含量较高的职业，高科技飞速发展的今天，许多当时的先进技术不久就陈旧落后，检测工作也一样，优秀的化验员总是虚心好学，善于研究，总是处在科技的前沿。
⑥人员素质，积极向上，乐于助人，对工作负责，工作第一等，努力提高自己的工作质量。
二、微生物检测
1.实验前的准备
1.1无菌间
无菌间是微生物实验的重要环节，关系到实验结果的准确性，无菌间的使用规范要严格要求，保证实验环境影响因素降到最低。
使用要求：
1、无菌间在使用前，必须先进行清理、臭氧杀菌时间50min或紫外灯杀菌30min。
2、检测使用的器皿、样品等物品的进出，通过缓冲窗进行传递，使用完毕后紫外灯杀菌30min，开传递窗时禁止两边同时打开。
3、检测人员进入缓冲间后，先更换拖鞋、佩带无菌帽和一次性口罩，更换衣服，并将其摆放整齐，方可进入无菌间。
4、进入无菌室过程中，依次打开和关闭各缓冲间的门，以避免空气流通带入外界的杂菌。
5、无菌操作前必须使用75%酒精对手部进行消毒，接种有害菌种时必须戴手套。
6、进行接种所用的吸管，平皿及培养基等必须经严格消毒灭菌，打开包装未使用完的器皿，不能放置后再使用，金属用具应高压灭菌或用95%酒精点燃烧灼后使用，剪刀、镊子至少每周进行一次高压灭菌。
7、从包装中取出吸管时，吸管尖部不能触及外露部位，使用吸管接种于试管或平皿时，吸管尖不得触及试管或平皿边。
8、接种样品、转种细菌必须在酒精灯前操作，接种细菌或样品时，吸管从包装中取出后及打开试管塞都要通过火焰消毒。
9、接种环或针在接种细菌前应经火焰烧灼全部金属丝，必要时还要烧到环和针与杆的连接处，接种结核菌和烈性菌的接种环应在沸水中煮沸5min，再经火焰烧灼。
10、吸管吸取菌液或样品时，应用相应的橡皮头吸取，不得直接用口吸。
11、检验结束后，所有带菌的培养基、试剂、稀释液和器皿必须尽快清理出无菌间灭菌洗刷。
12、检验结束后，人员离开无菌间前，须将无菌间的卫生彻底清理、并用紫外灯进行杀菌。
13、无菌间所用工器具（剪刀、镊子、胶头、涂抹棒、托盘盒等）使用完毕后，摆放整齐。
14、灭菌后的无菌间悬挂“已灭菌”标识，正在使用的无菌间要悬挂“使用中”标识。防止检测人员在未经过灭菌的无菌间中进行微生物检测。
其它注意事项：
1. 禁止在无菌间内打手机，由于业务需要可在缓冲间内打手机。
2. 实验过程中穿着整齐，不要出现露头发、鼻孔等现象，禁止在无菌间打闹、喧哗。
3. 实验过程中，物品要摆放整齐，实验产生的垃圾要单独存放不要乱放，防止污染实验样品。
4. 紫外灯每周五打扫卫生时要用酒精棉球擦拭，防止灰尘阻挡影响杀菌效果。
1.2实验器具
实验器具是微生物实验的一个关键控制点，实验器具的无菌是保证实验结果准确的重要因素。
①培养皿，首先应确认是否经过消毒，确认后进行外观检查，观察是否有破损，有破损处废弃。灭过菌的平皿最多保存一周时间。打开的平皿整齐的摆放到实验台上备用，发现有破裂的平皿应废弃；使用时看是否有平皿内部存有杂质、培养基等异物也应立即废弃。
②玻璃器皿，新购置玻璃器具因含有游离碱，应在清洁液或2%盐酸内浸泡24小时，再用蒸馏水清洗。检验沾染的油迹、污浊物等器具可用10%NaOH浸泡1小时后，用清水冲洗干净。每周洗刷盛生理盐水的三角瓶子，防止水垢太厚影响灭菌和微生物生长。
③实验完毕后，使用的实验器具应立即清洗消毒，防止微生物增长污染或者伤害到人员。所有卫生用具如拖把、扫帚、抹布、垃圾桶等都要根据污染区、清洁区、无菌区要求严格区分开、并专用，不得相互混淆，卫生用具每周定量用1：20次氯酸钠液消毒浸泡、清洗、凉干，以免污染。
④在进行各种检验时，应避免污染；遇有场地、工作服等污染时，应立即处理，防止细菌扩散以免造成污染。凡吸过菌液的吸管或滴管或染菌的培养皿，应立即放入盛有消毒液的容器内或高压灭菌处理。工作人员必须每天坚持做好环境卫生工作，防止灰尘飞扬，定期对整个操作环境进行消毒。
1.3药品的使用
微生物药品是微生物实验的一个关键控制点，培养基质量的关系到检测结果准确的重要因素。
①药品的采购，实验药品缺少时，由药品管理员上计划。微生物药品常规药品按“箱”进行计算，不常用药品按“瓶”进行计算，生化鉴定管按“支”进行计算，每种保留至少1个单位库存量。
②药品取用，药品取用时到药品管理员取钥匙，取用后将药品柜锁死，并将钥匙归还给药品管理员。取用人员发现药品低于1个单位库量时，及时通知药品管理员。
③将近过期药品（2个月），生化鉴定管可以退货，其他药品抓紧时间使用，过期药品废除。
④新药品使用时，应注意检查包装是否有破损？粉末状药品是否有结块？有无杂质？有无变色等异常。
⑤药品称量按照使用要求配制，并填写药品配制记录。
⑥配制好的药品按照灭菌要求进行，含糖的培养基灭菌总时间不超过45min，灭菌后观察培养基的颜色、容量等，并摇匀培养基，放置琼脂沉淀到底部。
⑦培养基使用前，按要求进行溶解，在溶解过程中要防止二次污染和溶解不充分；溶解后放到45~50度，放置备用时间不超过4h。
⑧使用时，进行冷却温度控制到45度左右，过高容易杀死微生物，过低培养基凝固。
⑨倾倒培养基时应注意无菌操作，并摇匀培养基。倾倒过多，培养基过厚需氧环境不好，过薄培养基容易干裂影响检测结果，配制培养基尽可能按照样品量进行配制，使用后的培养基根据情况废弃或保存。
1.4灭菌锅的使用
灭菌锅属于高压灭菌容器，安全性和灭菌效果是控制的重点，使用规范如下：
安全事项：由于灭菌锅属高压容器，压力表要及时计量，操作过程中人员不得离开现场，如有异常问题及时通知相关人员，机修，管道。
①检查高压灭菌锅的外观是否正常，压力表、温度计是否归零，各管路阀门是否为关闭状态。
②排放物品，注意不要过满；关锅并将标示牌转到已灭菌，调节阀打到排气状态。
③打开总阀门，打开排水法，进行管道排水，约1-2min当听到无水声时，关闭排水法。
④打开进气阀和出气阀，进行排气，此过程是对锅内空气进行排气，防止空气存在影响灭菌效果。
⑤排气等夹层压力达到0.5Mpa，将调节阀调到灭菌状态进行灭菌，培养基121℃15min；其他特殊培养基安灭菌要求进行灭菌。注意事项由于温度为手控，所以灭菌过程中要注意温度的变化。
⑥灭菌完毕后，填写灭菌记录，并关闭进气阀，排气阀不用关闭，并等温度降低60度左右，压力降到0；如果压力过大时开锅有可能打不开，另一个容易造成液体倒吸使瓶塞蹦出。
⑦开锅后，及时将培养基取出摇匀后冷却，物品取出后负责人要及时清锅，防止其他物品污染灭菌物品。
⑧灭菌结束后，将排水阀打开，防止管道积水。
其他注意事项：
①温度计无变化：1.温度计损坏，2.电源未打开，3.探针堵塞，4.调节阀损坏不进气。
②锅门打不开：1.压力过大，2.调节阀损坏，内部负压。
③管道漏气：找管道维修。
④灭菌锅的每周清洁污物及凝结水同时清洗；灭菌锅要保持干净并无残留物（尤其滤器）以防止生锈保证最大热传递和橡胶用具以蒸沸15min灭菌为宜，高温高压处理易失去弹性。
⑤容积控制：采取称中法测定蒸发量，体积100vml稀释起重量为101vg，高压够体积偏差不超过1%。
1.5培养箱的使用
培养箱的温度、湿度控制是微生物控制的关键点。使用规范如下：
①外观检查，有无噪音，是否放平稳，有无故障。
②检查温度设置是否为检测要求温度？显示温度与设定温度是否在允许波动范围内。
③为了保持培养箱内部湿度，可在培养箱内放一个盛水的小烧杯，防止培养基干燥。
④培养箱内物品摆放整齐，但不要过紧密，防止温度，空气等环境之间的差异对检测结果的影响，并关好箱门（轻开轻关）。
⑤每天对培养箱内温度计和显示温度进行比较，填写仪器设备使用记录，对较大差异的查找原因进行处理。
⑥保持好培养箱内卫生，对有异味的培养箱进行通气，并每周对培养箱进行消毒杀菌,培养后的平皿及时清理，防止霉菌或其他微生物累积。
⑦冰箱每周进行除霜清理，存放的物品做好记录，对不用的物品及时清理。
三、样品接收
2.1送检样品的处理
微生物接受样品，就是检验工作开始之时，样品接收、交接环节是检验工作的第一环节，关系到检验工作质量和效率。
为了真实的反应车间加工产品的质量情况，正确的指导车间生产。具体措施如下：
化验员到车间自取样品，保证每个车间每周1个样品，并在化验结果后备注“自取”。另外有特殊情况可增加取样量，微生物考核时按正常样品计算，在自取样品栏里填写。
2.2样品运输
个人车间样品由自己取，便于与车间交流沟通，掌握产品信息和工艺，对微生物检测判断有帮助。微生物样品运输过程中必须采用保温袋，防止温度变化；另外运输过程中样品不要落地，防止袋子破损污染样品。
2.3样品保存
冷冻品按要求进行解冻，干燥食品可放在常温冷暗处，易腐和冷却样品应放入10℃环境。冷冻样品来不及检验应放入-15℃以下冰箱内。
原则上冷冻样品取出后，按包装原样在室温下自然解冻；也可在0-4℃环境解冻，时间不超过18小时；也可在温度不超过45℃环境中解冻，时间不超过15min。
2.4样品制备
根据样品不同性状、类型的食品，进行适当处理，尽可能的保证均匀取样。或按照检测方法进行样品处理。
四、日常工作
4.1文件资料及物品的规定
为了规范微生物资料管理，起到工作有秩序的目的，防止重要资料丢失。特对资料整理规定如下，希望大家严格执行，为我们创造一个良好的工作环境。
4.1.1个人桌面
1.原始记录夹子要有对应车间的标签，没有的可向组长索要打印一张，不要出现标签与内容不符的现象。
2.个人资料必须放到夹子里面，不要在桌面出现装订纸张。
3.原始记录、抽取单不要随意乱放，防止客户参观时随意翻看，泄漏客户机密，记录完毕后，要整齐放到办公室夹子座里面。
4. 其它资料包括书籍等要放到小柜里，借阅、归还时要到资料管理员签字，借阅的书籍也不要乱放，看完后要整齐放在办公室桌子，禁止放到实验区（可在实验区阅读）。
5. 有单页报告单或者其他资料时，可放到插页夹子里，每组一个，桌面不要出现单页纸。
4.2电子文档
1.电脑不允许下载歌曲游戏等。
2. 建立的新表格无用处时立即删除。
3.提供客户报表要存到相应的文件夹，防止文件丢失，并对提供文件标黄底
4. 不可随意改动报表，尤其是汇总结果时禁止在车间报表上直接改动。
5. 每月结束后，设备管理员负责进行数据拷贝留存。
