支原体常用培养基为PPLO,很多公司都有出售.但血清 (常用马血清或猪血清)和抗生素(醋酸跎)你要自己加.你可以查查.还有改良的Frey's培养基，常用的微生物实验技术书上都可以查到的。可以自己配制的。在液体培养基中通常要加入酚红做指示剂的，当培养基由红色变为黄色时，即可判定支原体的生长程度。要强调一点，支原体的分离可能不太容易，那么要多盲传几代。液体培养基变黄后，在固体培养基上单克隆，以纯化分离的菌。所有解脲，人型，肺炎，生殖道支原体培养基 ，均为液态，不知道homiao要分离哪种支原体，需要哪种支原体?
1、培养 ：支原体的培养37℃即可，当然，初次培养37℃，5%-10%co2效果更好。其中，解脲支原体生长比较快，用我所培养基，接种量104- 105ccu，培养16-18h即可达到对数生长期。人型，肺炎，24-48h即可达到对数生长期。
2、鉴定：主要靠菌落染色、生化反应及特异性生长抑制试验等.
(1)Dienes菌落染色 Dienes染色液： 美蓝 2.5g 天青-Ⅱ 1.5g 麦芽糖 10g 碳酸钠 0.5g 蒸馏水 100ml
染色时，直接吸染色液覆盖菌落，1min后，用生理盐水洗去染色液，低倍镜下可见支原体菌落呈蓝色，而其他菌菌落不着色。
(2)生化反应
根据不同采样部位及对底物的分解或者作为能源，可以鉴别不同支原体。
解脲支原 分解尿素不分解精氨酸，生成NH3使培养基的ph升高，酚红指示剂变红。
人型支原体分解L-精氨酸不分解尿素，生成NH3使PH值升高，酚红指示剂变红。
肺炎和人型支原体分解葡萄糖，使pH降低，酚红指示剂由红变黄。
(3)在含0.002%美蓝的培养基中肺炎支原体能生长且将美蓝还原而退色，其他口腔、唾液或发酵支原体均被抑制生长，此法可鉴定肺炎支原体。
(4)分子生物学鉴定
由于支原体的基因文库已建立，通过pcr扩增和基因探针技术可以对支原体进行鉴定。
如果要自己配制培养基，现提供几种配方：
基础培养基：Hayflick培养基(PPLO培养基)，牛心粉 50g 蛋白胨 10g 氯化钠 5g 加14g琼脂粉为固体培养基
(1) 肺炎支原体培养基
基础培养基 70ml 牛血清 (灭活) 20ml 25%的酵母浸液 10ml 50%葡萄糖 1-2ml 0.4 酚红 0.5ml 制霉素 0.001g 青霉素 10万IU pH 7.8
(2)人型支原体培养基
基础培养基 70ml 马血清 20ml 25%的酵母浸液 10ml 30%L-精氨酸 0.33ml 0.4%酚红 0.5ml 制霉素 0.001g 青霉素 10万IU pH 6.3
(3)解脲支原体培养基
基础培养基 70ml 马血清 20ml 25%的酵母浸液 10ml 30%尿素0.33ml 0.4%酚红 0.5ml 制霉素 0.001g 青霉素 10万IU pH 6.0
注：由于支原体能在人工培养基上生长，但是营养要求较高，需要提供胆 固醇和酵母才能生长。以上配方中，马(牛).血清提供胆固醇，酵母浸液提供酵母。
