一. 实验要求
1. 实验前必须掌握与实验相关的医学微生物学、医学寄生虫学及医学免疫学基础理论。做好预习，明确实验目的与实验内容。
2. 对于设计性实验，在老师的指导下，注意发挥自身潜能，勤于思考，灵活掌握所学知识。
3. 在实验过程中做到三严：严肃、严格、严谨。如实记录实验结果，按规定完成实验报告。对于失败实验结果要分析原因，必要时重复实验。
4. 严格遵守实验室规则。
二. 实验室规则
1.进实验室穿工作服，离开时脱下，反折。
2.除必需教材、文具外，其他物品禁止带入实验室。
3.按规定位置就坐。保持实验室安静，不得随意走动、进出。
4.实验室内禁止饮食、吸烟。谨防经口感染病原。
5.实验操作应严格按实验指导和教师的要求进行。
6.实验过程中若不慎将传染性标本污染桌面、手及其他物品时，应立即报告老师紧急处理，不得擅自处理。常见处理如下：
（1）皮肤破伤：先除尽异物，用无菌生理盐水洗净后，涂以2%红汞或2%碘酒，必要时进行包扎。
（2）灼伤：涂以凡士林油，5%鞣酸或2%苦味酸。
（3）化学药品腐蚀伤：若为强酸，先用大量清水冲洗，再以5%碳酸氢钠或氢氧化铵溶液洗涤中和之；强碱腐蚀伤，则先以大量清水冲洗后，再用5%醋酸或5%硼酸溶液洗涤中和之。若受伤部位是眼部，经过上述步骤处理后，最后滴入橄榄油或液体石
腊1、2 滴，滋润之。
（4）吸入病菌菌液：应立即吐入盛有消毒液的容器内消毒，并用1：1000高锰酸钾漱口；根据菌类不同，必要时需服药预防。
（5）细菌污染衣物：应立即脱下，放入3%来苏尔或3%氯胺液内浸泡半小时，或仔细包好经高压蒸汽消毒后清洗。
（6）菌液污染桌面：倾倒适量2-3%来苏尔或0.5% 84 消毒液于污染处，浸泡半小时后抹去。若手上沾有活菌，应浸泡于上述消毒液10-20 分钟后，再以肥皂水冲刷之。
7.看示教时，未经允许，不得移动显微镜推进尺。
8.爱护实验室器材及设备，认真填写实验设备使用纪录。不慎发生损坏时，应立即报告老师，照章赔偿。
9.实验结束后，凡使用过的实验器材必须放在指定地点，如吸过菌液的吸管，毛细吸管要投入含有2-3%来苏尔或0.1%新洁尔灭的玻璃筒中，或置“待消毒”处，不得放在桌上，亦不可冲洗于水槽内。用过的波片也应放于含有消毒液的容器内。需要培养的实
验材料集中后放入温箱中培养。
10.实验完毕，应及时清理实验室（包括桌面，地面，试验用具等），值日生打扫室内卫生，管好门窗、水电。离开实验室前，将双手在消毒液内浸泡3-5分钟，再用清水洗净，方可离室。
三. 显微镜的使用
（一）普通光学显微镜的基本结构
光学显微镜的基本结构包括光学和机械两个部分。光学部分主要有目镜、物镜、镜筒、内置光源（或反光镜）、光阑等；机械部分包括镜座、镜臂、调节螺栓、载物台、夹持器、
转换器、粗调焦手轮及细调焦手轮等。（见图1-1）
图1 光学显微镜的基本结构示意图
（二）显微镜（油镜的使用）
显微镜的物镜一般有低倍镜、高倍镜及油镜。病原生物学实验中最常用者为油镜。
1.油镜的原理 使用油镜时需在玻片上滴加香柏油。由于从标本玻片上透过的光线，因介质密度不同，部分光线发生折射散失，使射入物镜光线减少（高倍镜孔径较大，影响不显著），因油镜的孔径较小，进入的光线则不够，致使物象显现不清。当在油镜与标本片之间加香柏油后，香柏油折射率（n=1.515）和玻璃的折射率（n=1.52）,因此可增加进入透镜的光线，使视野亮度加强。
2. 在油镜头上常有下列几种标记：①放大倍数是90×或100/；若镜筒的长度不变，显微镜的放大倍数=目镜倍数乘以物镜的倍数。②镜头下缘有一白色线圈或黑色线圈；③刻有
“油”或外文“HI”、“Oel”、“Oil”等字样。④油镜头的长度大于低倍镜和高倍镜。
3. 使用方法
① 对光 转动转换器，将低倍镜镜头（4 倍、10 倍）转至载物台中央透光孔位置，打开透光光阑，对光，直至目镜中出现光线最明亮、最均匀的视场为止。显微镜的光源可分为内置光源和外置照明。内置光源：接通电源，按下底座的开关，电源打开即可。外置光源：将光圈放到最大位置，在用眼睛观察目镜的同时，转动反光镜使其朝向光源（自然光或灯光），使视野中的光线最明、均匀。如靠近光源，可用平面反光镜，如距光源较远，可用凹面反光镜。根据所观察的标本，升降集光器和缩放光圈，以获最佳光度。一般染色标本用油镜检查时，光度宜强，可将光圈开足，集光器上升至与载物台相平；检查未染色标本用低倍镜或高
倍镜观察时，应适当缩小光圈，下降集光器，使光度减弱。
② 装片 将标本片放置在工作台的夹持器中，用夹持起移动标本片至工作台开口中心（透光孔处）。
③ 调节焦距 通过旋转粗调焦手轮，将载物台升到最高限定位置（制片不能触到物镜），此时已准备好调焦。使用4 倍或10 倍物镜，在目视目镜的同时，旋转粗调手轮，使工作台缓慢下降，在目视目镜中观察到的清晰的图像时，再调节光阑聚光镜孔，选择与物镜相匹配的孔，调节微调焦手轮，使视野中的图像最清晰。用低倍镜找出标本的范围，然后提高镜筒，在标本的待检部位加一小滴香柏油，慢慢将油镜头浸于油中，但勿接触玻片。然后，自目镜处一面观察，一面微转动粗调节器，使镜筒徐徐上升，待看到模糊物象时，改用细调节器调至物象清晰。如果是滴片标本，先滴一滴标本在玻片上，轻轻盖上盖玻片。加盖玻片时，先将盖玻片的一边与在玻片上的水滴边缘接触，然后自一侧轻轻放下，先在低倍镜下观察，然后在高倍镜下观察，通过改变光圈的大小或转动细调焦手轮。
④ 还镜 观察完毕把镜头和载玻片上的油用3%乙醚擦净。将低倍镜转成八字型.降下聚光器, 转动粗调节器,使镜台下移,以免接物镜与集光器相碰受损。罩上镜套，放回原处。
