我国现有结核病人约450万例,每年病死近13万人[1]。造成上述严峻形势的重要原因之一是结核病的早期快速诊断技术不理想。目前已有的结核抗体检测试剂均为未纯化的结核菌菌液抗原,存在特异性差异的问题[2,3]。我们对南京大渊生物技术工程公司使用的基因工程表达的结核菌蛋白和脂多糖生产的结核芯片系统进行了检测实验,取得较理想的快速诊断效果。
1 材料与方法
111 结核病患者血清标本 由武汉钢铁公司第二职 工医院、海口市结核病防治所、海南省农垦总局医院 提供,共226份。其中活动性肺结核（痰涂片或者细菌培养结核菌阳性）病人血清113份,慢性肺结核病人血清90份,结核性胸膜炎、结核性脑膜炎、肾结核病人血清23份。正常对照血清由海南省农垦总局医院住院非结核病人血清48份,门诊体检病人血清53份,共101份。
112 蛋白芯片 结核菌多抗原的IgG抗体芯片检测 系统（简称:结核芯片系统）:南京大渊生物技术工程有限公司提供。
113 结核抗体检测ELISA试剂由四川省绵阳市404 医院科技开发部提供。
114 PBT-X2蛋白芯片阅读仪由南京大渊生物技术 工程有限公司提供。
115 芯片系统实验方法 先在芯片上标记上样品编 号,再在芯片盒窗口内滴加4滴试剂A,使膜表面完全浸湿。待完全渗入后,室温放置1min,加待检血清 100μl。待血清完全渗入后,再滴加6滴试剂B。待试剂B完全渗入后,滴加10滴试剂C。待试剂C完全渗入后,最后滴加6滴试剂D。反应完毕后30min内,将芯片放入芯片阅读系统进行分析。阴性和阳性结果根据仪器生产厂家设置参数自动判别。
2 结果
211 结核芯片系统检测各种类型结核病人的阳性率 结核芯片系统检测活动型肺结核、慢性肺结核和其 它结核病人的敏感性分别为79165%（90/113）、
212 结核芯片系统各种指标检测的意义 见表2。 抗结核菌单个抗原的抗体阳性率以抗38kDa的阳性率最高,为15149%,次之为抗LAM抗体阳性率 （10162%）,最低为抗16kDa抗体的阳性率（8141%）。三个单指标阳性率之和为33152%。 抗结核菌三种抗原的抗体均阳性的比例最高,占21168%。其他各种抗原或者抗原组合的抗体阳性率 的构成比见表2。
表2 各种结核菌抗原的抗体阳性率构成比 Table2 ThepositiveratesofTBantibodiesto3kindsofMtuberculosis antibodiesdetectedbyTBproteinchipmethod LAM16kDa38kDa阳性结核病例数所占比例（%） +++4921168--+3515149+--2410162-+-198141-++187196++-125131+-+10144---6830109合计 226 100100 213 结核蛋白芯片的主要性能指标 敏感性为69191%（158/226）,特异性为84116%（85/101）。阳性 预测值为9018%（158/174）,阴性预测值55156%（85/ 153）。诊断效率为154176%。见表3。
表3 结核蛋白芯片法检测结核病人和对照组的结果Table3 ResultsofdetectionofTBpatientsandthecontrols标本分类阳性阴性合计病人15868226对照1685101合计 174 153 327 214 结核芯片检测系统检测结果与ELISA法检测结 果的比较 ELISA法检测结核病人标本的阳性率为66181%（151/226）。
结核蛋白芯片法检测结核病人抗体的总阳性率为69191%（158/226,见表1）。两者之 间差异无显著性（χ2=110,P>0105）。ELISA法检测对照组的结核抗体阳性率为13186%（14/101）,特异性 为86114%。ELISA检测的特异性与结核芯片检测系 统的特异性84185%（85/101）相当,二者之间差异无显 著性（ χ2=110,P>0105）。
215 结核芯片系统检测与ELISA技术检测的总符合 率 两种方法检测结核病人标本均阳性130例,均阴性47例,合计为177例,二者检测结核病人的符合率为78132%（177/226）。
两种方法同时检测对照组标本101份,二法均阳性7例,均阴性81例,合计为94例。 符合率为93107%。两法检测结核病人和对照组共327份标本,均阳性134例,均阴性131例,相符总数为265例。总符合率为81104%（265/327）。3 讨论 检测结核菌抗体用于结核病的诊断一直是结核病防治研究追求的目标。抗结核分枝杆菌多种抗原的IgG抗体检测蛋白芯片系统点样了3种结核菌或者结核菌复合群特异性抗原,即脂阿拉伯甘露糖（LAM）[4,5]、16kDa[6]和38kDa[6,7]蛋白等三种抗原。这三种抗原的抗体检测对于结核菌感染的血清学辅助诊断具有很高的敏感性、特异性[6]。
因此,检测可疑患者血清中检测此特异性抗体,而对结核病患者的早期诊断、机体免疫功能的动态监测以及结核病感染的大规模血清流行病学调查具有很高的应用价值。 结核芯片系统检测抗多种结核菌抗原的抗体的敏感性为69191%,特异性为84185%,诊断指数为154176%。阳性预测值和阴性预测值分别为9018%及55156%。结核芯片系统和ELISA检测的总符合率达81104%。表明该试剂符合临床诊断结核病的要求,可 用结核病的血清学辅助诊断。
