影响ELISA试验效果常见问题原因分析及解决办法

操作步骤

可能原因

解决办法

选择试剂

选择质量优良的检测试剂，严格按照试剂说明书进行操作，操作前将试剂在室温下平衡30-60分钟。

加   样

1.血清或血浆标本分离不好即进行加样；
2.手工操作中，加样板过多造成加样后放入孵箱前等待时间过长特别是室内温度较高时；
3.加完标本再加酶试剂时酶溅出孔外。

1.标本为血清：最好将血液先自然存放1-2小时后，再用3000rmp离心15分钟；标本为血浆：必须使用含抗凝剂的血液标本收集管，采血后必须立即颠倒采血管混合5-10次，放置一段时间后，3000rpm离心15分钟；若在几天内检测，可放在2-8℃冰箱中，若要贮存，则置于-20℃的低温冰箱内。
2.加样后及时放入孵箱。
3.加酶试剂后用吸水纸在酶标板表面轻拭吸干。
4.如果采用AT或其他全自动加样，最好选择FAME或其他后处理仪器加酶试剂。
5.标本较多时，请分批操作。

孵   育

1.孵育时未贴封片或加盖，使标本或稀释液蒸发，吸附于孔壁，难于清洗彻底；
2.孵育时间人为延长，导致非特异性结合紧附于反应孔周围，难以清洗彻底。

1.贴封片或加盖；
2.按说明步骤严格控制操作时间。

洗   板

1.采用手工洗板,孔与孔之间液体交叉。
2.采用半自动洗板机洗板时，洗液量不足，导致洗板不彻底；洗板针堵塞，抽吸不完全；洗板不畅，导致洗板效果差。
3.反应板过多造成洗板等待时间长。

1.保证洗液注满各孔，洗板针畅通，洗完板后最好在吸水纸（选择干净、无或少尘的吸水材料）上轻轻拍干；
2.合理安排，或多用几台洗板机。

显   色

1. 显色剂配制后放置时间过长或使用过期显色剂；
2. 加显色剂时溅出孔外造成液体回流。

1. 显色剂尽量在临用前配制，坚持不用过期显色剂，肉眼可见浅蓝色的TMB显色剂不用；
2. 加样时保持显色剂不外流；
3.A、B液应避免接触金属器械。

终   止

加终止液时产生较多气泡，导致假阳性增加。

加终止液时应避免产生气泡。

读   板

读板时板底不清洁。

应保证酶标板清洁。

全过程

1.整个操作过程中保证酶标板不接触次氯酸;
2.实现ELISA检测标准自动化，有效提高检测质量。